[发明专利]H5和N8亚型禽流感病毒双重纳米PCR检测的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种H5和N8亚型禽流感病毒双重纳米PCR检测引物组，包括引物H5-F、引物H5-R、引物N8-F、引物N8-R；

所述引物H5-F的序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物H5-R的序列如SEQ ID NO.2所示，所述引物N8-F的序列如SEQ ID NO.3所示，所述引物N8-R的序列如SEQ ID NO.4所示。

2.含有权利要求1所述引物组的试剂或试剂盒。

3.使用双重纳米PCR检测H5和N8亚型禽流感病毒的方法，其特征在于，双重纳米PCR所用的引物为权利要求1所述的引物组。

4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样品的cDNA；

(2)建立双重纳米PCR反应体系，利用上述引物组进行双重纳米PCR反应；

(3)将PCR反应产物通过琼脂糖凝胶电泳检测，当样品扩增出207bp和428bp条带时，说明该样品为H5N8亚型禽流感病毒；当样品只扩增出207bp条带时，说明该样品为H5Ny(y≠8)亚型禽流感病毒；当样品只扩增出428bp时，说明该样品为HxN8(x≠5)亚型禽流感病毒。

5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中双重纳米PCR反应体系为：2×Nano-QPCR buffer 12.5μL，Taq DNA polymerase(5U/μL)0.5μL，待测样品cDNA模板2μL，引物H5-F和H5-R(20pmol/μL)加入量为0.8μL，引物N8-F和N8-R(20pmol/μL)加入量为1.2μL，加入ddH2O补足至终体积至25μL。

6.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中双重纳米PCR反应条件为：94℃3min；进入94℃20s，50℃30s，72℃30s，共30个循环；然后再72℃延伸5min，最后4℃结束反应。

7.权利要求1所述的引物组或含有该引物组的试剂盒在检测H5和N8亚型禽流感病毒中的应用。