[发明专利]一种具有免疫调节活性的浒苔多糖及其制备方法

说明书

本发明涉及公开一种浒苔多糖PWEP‑1的制备方法及其免疫调节活性作用。本发明的浒苔多糖由水提醇沉法提取并经离子交换柱和凝胶柱层析分离纯化得到，所述的浒苔多糖分布范围为1000‑5000Da，主要由87.42%、7.10%、1.67%、2.67%和1.13%的甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖和木糖组成。体外实验评估发现PWEP‑1可提高RAW264.7吞噬能力，并促进NO、TNF‑α和IL‑1β等细胞因子的分泌。PWEP‑1可作为免疫调节剂添加到功能性食品中，为新型的浒苔产品的研发提高理论依据，提高浒苔的食用及商业价值。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种碱法提取的具有免疫调节活性的浒苔多糖及其制备方法。

背景技术

浒苔（EnteromorphaProlifera）是一种绿藻，俗称苔条、海苔，为绿藻门，石莼目，石莼科植物。在世界的潮间带广泛分布，特别是在中国，波罗的海和智利，在我国东部沿海分布较多。我国的医药典籍中记载了浒苔自古以来就被我国沿海居民食用和药用。近年来，由于浒苔的大量繁殖，破坏了海洋环境的生态平衡，甚至造成严重的“绿潮”危害，因此如何更好的利用这种海洋资源，变废为宝成为研究开发的热点领域。

免疫刺激本身被认为是改善老年人以及癌症患者体内防御机制的重要策略之一，免疫刺激性多糖是相对较新的一类生物活性化合物，在增强身体对病毒和细菌感染的天然抵抗力，或协助治疗免疫力低下的疾病，例如癌症和艾滋病。到目前为止，已建议使用各种类型的葡聚糖，甘露聚糖，半乳聚糖和岩藻依聚糖作为免疫刺激剂，直接或间接与免疫系统相互作用，增强机体的免疫能力。浒苔作为一种常见的绿藻，多糖是浒苔的主要生物活性成分，通过对浒苔多糖的研究以期发现新的具有免疫调节活性的多糖。

中国专利CN108752495A，报道了一种通过酶解和碱液浸提的制备浒苔碱溶性多糖的方法，但该方法并未对制备的浒苔多糖的单糖组成，糖苷键类型以及抗肿瘤活性进行研究。目前尚未见到关于浒苔多糖的免疫调节活性的研究报道，该发明首次研究了一种具有免疫调节活性的碱法提取的低分子量多糖，可以为浒苔的开发应用提供一定的理论依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种碱法提取的具有免疫调节活性的浒苔多糖。以下为本发明具体技术方案：

一种具有免疫调节活性的浒苔多糖，通过碱液提取利用阴离子柱层析和凝胶柱层析分离纯化得到，所述的浒苔多糖分子量分布范围为1000-5000Da，平均相对分子量为4259Da,为β构型吡喃糖，主要由摩尔比分别为87.42%、7.10%、1.67%、2.67%和1.13%的甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖和木糖组成。体外实验研究发现可提高RAW264.7细胞的吞噬能力，并促进NO、TNF-α和IL-1β等细胞因子的分泌。

浒苔多糖的提取分离方法具体为：将粉碎的浒苔脱脂处理，脱出色素等小分子杂质，晾干后将浒苔用去离子水提取，料液比（V:V=1：10），得到水提残渣，水提的残渣再利用0.3M NaOH溶液提取，脱蛋白，透析，冷冻干燥以后得到粗提多糖。将粗提多糖用去离子水复溶后上样用阴离子柱层析，用蒸馏水洗脱，苯酚硫酸法测定糖含量绘制洗脱曲线，收集合并组分，冻干后用凝胶柱层析进一步纯化，去离子水洗脱，再次采用苯酚硫酸法测定糖含量并绘制洗脱曲线，收集组分，再经浓缩、透析、冷冻干燥后得到纯化的浒苔多糖。

所述的浒苔多糖采用如下方法进行组成分析:将纯化获得的浒苔多糖用超纯水配制成样品溶液，滤膜过滤，取过滤样品液上样至高效凝胶渗透色谱HPGPC，确认浒苔多糖纯度及相对分子质量；然后另取纯化后的浒苔多糖，经三氟乙酸水解、PMP柱前衍生化进行HPLC分析，测定浒苔多糖的单糖组成；另取纯化后的浒苔多糖，经研细、压片机压片后在4000cm-1-400cm-1范围内进行红外光谱扫描分析，获得浒苔多糖的糖苷键类型。