[发明专利]一种快速鉴定水稻GAT植株的多重PCR检测试剂盒及应用

权利要求书

1.一种鉴定水稻GAT植株的特异性引物组合，其特征在于，含有以下任一对或多对特异性引物，包括引物Killer-F和Killer-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-2所示，引物Marker2-F和Marker2-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3-4所示、引物Marker1-F和Marker1-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.5-6所示、引物Marker3-F和Marker3-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.7-8所示；

所述水稻GAT植株是指转入GAT载体的转基因水稻植株；

所述GAT载体为含有以下任一或多个表达盒的载体，

(1)植物雄性育性恢复基因表达盒，用于恢复雄性育性；该表达盒为Complementation，其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；

(2)植物花粉败育基因表达盒，用于清除含GAT的花粉及保持GAT保持系的杂合状态；该表达盒为Killer 5400或Killer；Killer 5400的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，Killer的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；

(3)抗除草剂基因表达盒，用于基因转化及GAT保持系除杂提纯；该表达盒为Marker2AAU或Marker 2UAU；Marker 2AAU的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示，Marker 2UAU的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；

(4)除草剂敏感基因表达盒，用于清除除草剂敏感的GAT保持系花粉、种子及GAT不育系除杂提纯；该表达盒为Marker 1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；

(5)荧光基因表达盒，用于种子机械分选；该表达盒为Marker 3ZFN，其核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示。

2.如权利要求1所述的特异性引物组合，其特征在于，还含有一对内参引物GAPDH-F和GAPDH-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.9-10所示。

3.权利要求1或2所述特异性引物组合在检测转基因表达盒、或其表达量或拷贝数中的应用，所述的转基因表达盒为Killer 5400、Killer、Marker 2AAU、Marker 2UAU、Marker 1和/或Marker 3ZFN，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.12-17所示。

4.含有权利要求1或2所述特异性引物组合的试剂盒。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，其为以下任一试剂盒：

(1)植物花粉败育基因表达盒Killer 5400及Killer检测试剂盒；所述表达盒Killer5400及Killer的核苷酸序列如SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示；其含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物；

(2)抗除草剂基因表达盒Marker 2AAU、Marker 2UAU检测试剂盒；所述表达盒Marker2AAU和Marker 2UAU的核苷酸序列如SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15所示；其含有核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物；

(3)除草剂敏感基因表达盒Marker 1检测试剂盒；所述表达盒Marker 1的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；其含有核苷酸序列如SEQ ID NO.5-6所示的引物；

(4)荧光基因表达盒Marker 3ZFN检测试剂盒；所述表达盒Marker 3ZFN的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示；其含有核苷酸序列如SEQ ID NO.7-8所示的引物；

(5)内参基因GAPDH检测试剂盒；所述GAPDH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；其含有核苷酸序列如SEQ ID NO.9-10所示的引物；内参基因的扩增用于Killer 5400、Killer、Marker 2AAU、Marker 2UAU、Marker 1和Marker 3ZFN表达盒表达量或拷贝数检测；

(6)用于检测GAT载体的试剂盒，其含有5对引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-10所示。