[发明专利]治疗自身免疫性相关疾病的病毒载体及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种治疗自身免疫性相关疾病的病毒载体及其构建方法和应用，所述病毒载体为克隆有mfat‑1基因的慢病毒表达质粒或克隆有mfat‑1基因的腺相关病毒表达质粒，所述的mfat‑1基因如SEQ ID No.1所示；所述自身免疫性相关疾病包括系统性红斑狼疮，类风湿性关节炎和1型糖尿病。本发明所述的慢病毒(lentivirus)和腺相关病毒(AAV)为载体的病毒载体以及转染至细胞得到的相应病毒颗粒，利用基因重组技术高表达mfat‑1基因，具有显著的抵抗Th细胞分化失衡和炎症、促进胰岛beta‑细胞新生的作用；安全可靠，能满足临床使用需求；制备方法简单，容易操作；具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及免疫失衡诱发的自身免疫疾病治疗药物，具体涉及一种治疗自身免疫性相关疾病的病毒载体及其构建方法、应用。

背景技术

T淋巴细胞介导的细胞免疫是人体免疫应答的中心环节。其中，CD4⁺T细胞分化失衡导致的免疫紊乱和炎症与多种自身免疫疾病及神经退行性疾病的相关性获得科学家持续关注，并且部分机理得以阐明。CD4⁺T细胞在不同转录因子调控下可分化为Th1、Th2、Treg和Th17，并通过其所分泌的细胞因子相互制约，处于动态平衡状态。研究表明，细胞亚群Th1/Th2细胞及Th17/Treg细胞之间的失衡与多种自身免疫疾病密切相关，尤其是1型糖尿病(Type1 diabetes,T1D)，类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)，多发性硬化症(Multiple sclerosis，MS)，系统性红斑狼疮(Systematic lupus erythematosus，SLE)等。

1型糖尿病称为胰岛素依赖型糖尿病(insulin-dependent diabetes mellitus,IDDM)，为一种常见的器官特异性自身免疫性疾病，是严重危及儿童和青少年健康的慢性疾病之一。据美国糖尿病协会的评估,大约5％的糖尿病人为1型糖尿病，且多数于儿童或青年时期发病。在儿童及青少年患者中，T1DM所占比例约为80-90％。此外，尚有一类缓慢发病的成人隐匿性自身免疫糖尿病(Latent Autoimmune Diabetes in Adults，LADA)，在病因上亦属于自身免疫性T1DM，但由于患者起病年龄及临床表现均与2型糖尿病类似，易被误诊。我国1型糖尿病患者的绝对数已超过100万。1型糖尿病发病的整个过程中伴随一系列炎症和免疫紊乱的发生，主要表现为自身反应性T细胞对胰岛β细胞的攻击以及自身抗体的产生引起胰岛β细胞功能衰竭、坏死，导致胰岛素分泌的绝对不足，如治疗不善将发生严重的并发症，如失明、肾衰竭、心脏病、截肢等。

2型糖尿病称为非胰岛素依赖型(noninsulin-dependent diabetes mellitus,NIDDM)，占糖尿病中的绝大多数。不同程度的胰岛素缺乏和组织的胰岛素抵抗联合作用是引起2型糖尿病的主要发病机制。一旦2型糖尿病被确诊，胰岛β细胞功能进行性降低，肝脏葡萄糖生成和释放增多，引起血糖升高。

无论是1型还是2型糖尿病，自然病程都包括以下三个阶段：1.高血糖前期，此期可长达10年左右。1型糖尿病已存在β细胞免疫性破坏，其主要标志是出现GAD或ICA等自身抗体。2型糖尿病在此期间无特定的血清学标志，但常伴有高胰岛素血症及腹型肥胖等胰岛素抵抗综合征，胰岛功能显示糖耐量减低(impaired glucose tolerance，IGT)及(或)空腹血糖受损(Impaired fasting glucose,IFG)。2.高血糖期空腹及餐后血糖达到糖尿病的诊断标准。3.慢性并发症期。