[发明专利]一种生产依博素的基因工程菌及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 202010384261.3 | 申请日： | 2020-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN111484965B | 公开（公告）日： | 2021-11-02 |
| 发明（设计）人： | 白利平;郭未蔚;黄星宇;艾丽梅;耿梦馨;庄琢琛;郭连宏 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医药生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/76;C12N15/90;C12N9/10;C12N15/54;C12P19/04;C12R1/465 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 闫书宁 |
| 地址： | 100050*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生产 依博素 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.制备用于生产依博素的工程菌的方法，包括如下步骤：降低受体菌中Ste2蛋白的表达量和/或活性，获得用于生产依博素的工程菌；
所述受体菌为链霉菌139；
所述Ste2蛋白为氨基酸序列是SEQ ID NO：2所示的蛋白质；
所述降低受体菌中Ste2蛋白的表达量和/或活性是通过敲除受体菌中Ste2蛋白的编码基因来实现的。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述Ste2蛋白的编码基因为如下b1）或b2）所示的DNA分子：
b1）编码区是SEQ ID NO：1所示的DNA分子；
b2）核苷酸序列是SEQ ID NO：1所示的DNA分子。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述Ste2蛋白的编码基因是通过同源重组的方式进行敲除的；所述同源重组的片段包括链霉菌139中Ste2蛋白的编码基因的上游片段和下游片段。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：
所述链霉菌139中Ste2蛋白的编码基因的上游片段中具有链霉菌139基因组中引物1和引物2组成的引物对的靶序列；
引物1为SEQ ID NO：4所示的单链DNA分子；
引物2为SEQ ID NO：5所示的单链DNA分子；
所述链霉菌139中Ste2蛋白的编码基因的下游片段中具有链霉菌139基因组中引物3和引物4组成的引物对的靶序列；
引物3为SEQ ID NO：6所示的单链DNA分子；
引物4为SEQ ID NO：7所示的单链DNA分子。
5.由权利要求1至4中任一所述的方法制备得到的用于生产依博素的工程菌。
6.权利要求5所述工程菌在生产依博素中的应用。
7.一种生产依博素的方法，包括如下步骤：发酵培养权利要求5所述工程菌，收集发酵产物，从中获得依博素。
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