[发明专利]一种多发性骨髓瘤基因突变检测试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种多发性骨髓瘤基因突变检测试剂盒，所述的试剂盒包含分别与各检测基因对应的多个叠瓦式寡核苷酸探针，用于获取所述检测基因的热点突变区域的变异信息；所述检测基因包括48个检测基因：ATM、B2M、BIRC3、BRAF、CARD11、CCND1、CDKN1B、CDKN2A、CSF3R、CUX1、CXCR4、DIS3、DNM2、EGFR、FAM46C、FAT1、FGFR3、FLT3、IDH1、IDH2、IKZF1、IL7R、IRF4、JAK1、JAK2、KDM6A、KIT、KRAS、MYC、MYD88、NF1、NRAS、PDGFRB、PHF6、PIK3CA、PRDM1、PRPF40B、PTPN11、RB1、RELN、SF3B1、STAT3、SUZ12、TET2、TP53、TRAF3、WHSC1、WT1。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述叠瓦式寡核苷酸探针对应的其中8个检测基因的热点突变位点如下所示：

3.一种检测多发性骨髓瘤基因突变的方法，所述的方法包括以下步骤：

S1.裂解红细胞以获取白细胞：采集骨髓血液，使用红细胞裂解液裂解红细胞，经离心分离，获取纯的白细胞；

S2.筛选CD138+细胞：采用免疫磁珠分选出CD138+细胞；

S3.提取待测样本基因组DNA：利用天根DNA提取试剂盒对分选后的CD138+细胞进行抽提DNA，通过质检确保DNA浓度达10ng/ul以上；

S4.文库构建：使用超声破碎仪将基因组DNA随机打断成150bp～250bp的片段经末端修复、3’端加特异性的A尾、引入测序接头、纯化、PCR扩增构建文库；

S5.文库捕获及上机测序：使用试剂盒中叠瓦式寡核苷酸探针捕获48种基因特定外显子区域，通过高通量测序illumina平台的Novaseq 6000进行测序以获取48种基因特定区域的变异信息。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其中，步骤S1中，所述红细胞裂解液分两次加入，所述离心次数为两次，第一次离心条件为：冰浴10min后2100rpm离心10min；第二次离心条件为颠倒混匀震荡30s后2000rpm离心5min。

5.根据权利要求3所述的检测方法，其中，步骤S3中，利用Nano及Qubit定量检测DNA的OD值及浓度。

6.根据权利要求3所述的检测方法，其中，步骤S3中，通过凝胶电泳检测DNA的完整性，其中电泳条带应无明显拖尾。