[发明专利]基于FRET的PSA荧光探针、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种荧光探针，其特征在于，化学结构为：

2.如权利要求1所述荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步为直线肽固相合成：{Dabcyl}-GGHSSKLQLAAAK(5-FAM)，第二步为多肽树脂的裂解，第三步分离纯化，第四步为分析检测。

3.根据权利要求2所述荧光探针的制备方法，其特征在于：第一步直线肽固相合成操作为，用Fmoc-Lys(5-FAM)-Wang Resin S＝0.3mmol/g，采用Fmoc/Tbu合成策略工艺，从C端向N端依次缩合氨基酸链接，待直线肽缩合完成多肽树脂：依次偶联下列氨基酸及原料：A-02Fmoc-Ala-OH,A-03 Fmoc-Ala-OH,A-04 Fmoc-Ala-OH A-05 Fmoc-Leu-OH,A-06 Fmoc-Gln(Trt)-OH,A-07 Fmoc-Leu-OH,A-08 Fmoc-Lys(Boc)-OH,A-09 Fmoc-Ser(tbu)-OH,A-10Fmoc-Ser(tbu)-OH,A-11 Fmoc-His(Trt)-OH,A-12 Fmoc-Gly-OH,A-13 Fmoc-Gly-OH,A-14Dabcyl acid将肽树脂洗涤转移出干燥至恒重，待裂解。

4.根据权利要求2所述荧光探针的制备方法，其特征在于：第二步多肽树脂的裂解操作为，按照TFA:H₂O:EDT:TIS＝95:1:2:2比例，依次将所需裂解试剂H₂O、TFA、EDT和TIS加入裂解反应瓶，裂解试剂温度控制在0～10℃；裂解试剂在搅拌下加入肽树脂中，待体系温度稳定后，再温控在25～30℃搅拌反应2.5小时；将裂解液滤出，采用5倍浓缩液体积量的冷冻乙醚将其沉淀，滤出沉淀物并于室温减压干燥，得多肽粗品。

5.根据权利要求2所述荧光探针的制备方法，其特征在于：第三步纯化冻干操作为，将多肽粗品研细，准备纯化水，在搅拌下缓慢加入研细多肽粗品，同时滴加乙腈水溶液，待粗品加完并溶解完全后，用0.45μm的微孔滤膜过滤；粗品纯化采用岛津半制备并用5cm，10μm，C-18柱填料，在常温下用合适梯度进行分离纯化，收集目标产物，分析检测，归类；杂质纯度要求≥95％，将不合格目标物收集，用2cm，5μm，C-18柱用合适梯度再次进行分离纯化，将合格主峰减压冷冻干燥，得到粉末状精品。

6.根据权利要求2所述荧光探针的制备方法，其特征在于：第四步分析检测操作为，将合成的探针通过基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱和高效液相色谱法表征：MALDI-TOF-MS:470.3,[M+4H]⁴⁺；626.7,[M+3H]³⁺；939.3,[M+2H]²⁺；HPLC保留时间为13.690min。

7.如权利要求1所述荧光探针在前列腺特异性抗检测中的应用。

8.根据权利要求7所述荧光探针在前列腺特异性抗原检测中的应用，其特征在于：所述前列腺特异性抗原为含有前列腺特异性抗原的精液。

9.根据权利要求8所述荧光探针在前列腺特异性抗原检测中的应用，其特征在于：所述前列腺特异性抗原为含有前列腺特异性抗原的精液采用荧光探针检测时，在荧光显微镜下呈现黄绿色荧光。

10.根据权利要求8所述荧光探针在前列腺特异性抗原检测中的应用，其特征在于：所述前列腺特异性抗原为含有前列腺特异性抗原的精液为附在玻璃、纸或乳胶上。