[发明专利]一种采用连续过滤的外泌体质谱分析方法

权利要求书

1.一种采用连续过滤的外泌体质谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将待测液体整备后提取待测液体样本；

(2)将所述待测液体样本经过一级过滤膜、二级过滤膜和三级过滤膜三层过滤，在三级过滤膜上获取外泌体样本；

(3)直接取出所述三级过滤膜，使用由乙腈、三氟乙酸、去离子水和芥子酸制成的混合溶剂处理后，在所述三级过滤膜上进行质谱检测获得检测结果。

2.如权利要求1所述的采用连续过滤的外泌体质谱分析方法，其特征在于，所述一级过滤膜的孔径为1000nm，所述二级过滤膜的孔径为300-450nm，所述三级过滤膜的孔径为30-50nm。

3.如权利要求1或2所述的采用连续过滤的外泌体质谱分析方法，其特征在于，所述一级过滤膜、二级过滤膜和三级过滤膜之间都设置有中空套管，所述中空套管的直径4-6mm，待测液体样本通过中空套管和三层过滤膜的过滤速度为50μl/min。

4.如权利要求1-3任一项所述的采用连续过滤的外泌体质谱分析方法，其特征在于，所述一级过滤膜、二级过滤膜和三级过滤膜为混合纤维素酯膜或聚醚砜膜。

5.如权利要求1-4任一项所述的采用连续过滤的外泌体质谱分析方法，其特征在于，所述混合溶剂的制备方法为：先将乙腈、三氟乙酸和去离子水按体积比为50:0.2:49.8混合为初级溶剂，再将芥子酸和初级溶剂按质量体积比为18-20：1mg/ml混合制成混合溶剂。

6.如权利要求1-5任一项所述的采用连续过滤的外泌体质谱分析方法，其特征在于，在进行所述质谱检测时，采用线性正离子模式，并且离子加速电压为20kV，离子延迟提取时间为1000ns，激光强度85％。

7.如权利要求1-6任一项所述的采用连续过滤的外泌体质谱分析方法，其特征在于，在进行所述质谱检测时，质谱图谱检测的范围为2000-20000m/z之间。

8.如权利要求1-7任一项所述的采用连续过滤的外泌体质谱分析方法，其特征在于，将待测液体整备后提取待测液体样本具体为：将0.1ml人血浆样本采用去离子水稀释10倍，取1ml稀释后的溶液作为待测液体样本。

9.如权利要求1-8任一项所述的采用连续过滤的外泌体质谱分析方法，其特征在于，将待测液体整备后提取待测液体样本具体为：将10ml Hela细胞上清液样本采用3000r/min*10min弃沉淀后留存上清液，取1ml上清液作为待测液体样本。