[发明专利]一种报告基因细胞株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种嵌合基因，其特征在于，所述嵌合基因包括IFN-β启动子和报告基因；

所述报告基因为分泌性荧光素酶基因。

2.根据权利要求1所述的嵌合基因，其特征在于，所述报告基因为Gaussia荧光素酶基因；

优选地，所述报告基因位于所述IFN-β启动子的3’端；

优选地，所述IFN-β启动子和所述报告基因之间还包括Kozak序列；

优选地，所述嵌合基因包括SEQ ID NO:1所示的核酸序列。

3.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括权利要求1或2所述的嵌合基因。

4.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒为转染有权利要求3所述的重组载体和辅助质粒的哺乳细胞；

优选地，所述哺乳细胞包括293细胞、293T细胞或293F细胞中的任意一种或至少两种的组合，优选为293T细胞。

5.一种报告基因细胞株，其特征在于，所述报告基因细胞株整合有权利要求1或2所述的嵌合基因；

优选地，所述报告基因细胞株包括权利要求3所述的重组载体和/或权利要求4所述的重组慢病毒。

6.一种权利要求5所述的报告基因细胞株的构建方法，其特征在于，所述方法包括：

构建重组载体，采用所述重组载体与辅助质粒共转染哺乳细胞，构建重组慢病毒；

采用所述重组慢病毒感染宿主细胞，通过杀稻瘟菌素和有限稀释法筛选，得到所述报告基因细胞株；

优选地，所述重组载体的构建方法包括：

将权利要求1或2所述的嵌合基因插入慢病毒载体中，转化感受态细胞，经抗性、测序筛选后得到所述重组载体；

优选地，所述嵌合基因插入慢病毒载体的Spe I和Xba I酶切位点之间；

优选地，所述筛选时加入杀稻瘟菌素的浓度为5～10μg/mL；

优选地，所述宿主细胞包括A549细胞系。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对筛选得到的报告基因细胞株进行新城疫病毒和干扰素诱导剂处理的步骤；

优选地，所述干扰素诱导剂包括聚肌胞苷酸；

优选地，所述新城疫病毒的感染复数为0.5～2MOI；

优选地，所述干扰素诱导剂的浓度为1～5μg/mL。

8.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3所述的重组载体、权利要求4所述的重组慢病毒或权利要求5所述的报告基因细胞株中的任意一种或至少两种的组合。

9.一种权利要求1或2所述的嵌合基因、权利要求3所述的重组载体、权利要求4所述的重组慢病毒、权利要求5所述的报告基因细胞株或权利要求8所述的试剂盒在制备IFN通路激活状态检测试剂中的应用。

10.一种检测IFN通路激活状态的方法，其特征在于，所述方法包括采用接头蛋白和/或信号蛋白处理权利要求5所述的报告基因细胞株，采用发光检测仪检测报告基因细胞株的相对光强度；

优选地，所述接头蛋白包括MAVS蛋白和/或STING蛋白；

优选地，所述信号蛋白包括TBK1蛋白和/或IKK蛋白；

优选地，所述方法还包括采用新城疫病毒感染经接头蛋白和/或信号蛋白处理的报告基因细胞株的步骤。