[发明专利]一种核酸适配体分子印迹协同识别不锈钢网片的制备方法

权利要求书

1.一种固相萃取柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

在烧杯中加入不锈钢网片和丙酮，用丙酮浸泡不锈钢网片72 h，丙酮每24 h更换一次；配制含有50 g/L NaOH、20 g/L Na₂CO₃、20 g/L Na₃PO₄的混合碱液250 mL，将丙酮浸泡后的不锈钢网片放入该混合碱液中，在80℃水浴搅拌加热下清洗30 min，取出不锈钢网片后用去离子水清洗干净后烘干备用；然后，在一个干净的反应容器中，依次加入5 mL pH=7.45的HEPES缓冲溶液、干净的不锈钢网片、37 μL 50mM的FeCl₃溶液以及24 μL 50 mM单宁酸溶液，在室温下振荡反应1 min，反应结束后取出不锈钢网片用去离子水洗干净并烘干；接着，在另一干净的反应容器中，加入单宁酸处理过的不锈钢网片、10 mL KH570、10 mL甲醇和80mL去离子水，该反应容器置于摇床中，在温度30℃、摇床转速250 rpm 条件下反应30 min，反应结束后用甲醇将不锈钢网片洗涤干净，并烘干备用；

在10 mL离心管中加入3 mL pH=7.45的HEPES缓冲溶液、经过上述处理的不锈钢网片，10 μL 1 mg/mL模板分子溶液、50 μL 66 μg/mL核酸适配体溶液和25 μL MAA，向离心管中充入氮气，然后将离心管置于摇床中，在温度60℃、摇床转速250 rpm 条件下预反应20min，再加入交联剂36.0 mg MBA，向离心管中充入氮气，然后将离心管置于摇床中，在温度60℃、摇床转速250 rpm 条件下预聚合30 min，最后加入引发剂34 μL 0.2499 mol/L APS溶液与2 μL 6.6695 mol/L TMEDA 溶液，重新向离心管中充入氮气，再将离心管置于摇床中，在温度60℃、摇床转速250 rpm 条件下聚合反应20 h；反应结束后，用含体积比10%的乙酸的甲醇多次洗涤不锈钢网片去除模板分子；其中，所述模板分子为赭曲霉毒素A和/或伏马毒素B1；所述核酸适配体对应于所述模板分子，且末端通过炔基修饰；

将所得的不锈钢网片组合堆叠，作为填料装填于固相萃取柱的管体中，得到所述固相萃取柱。

2.一种固相萃取柱，其特征在于：是由权利要求1所述的制备方法得到。