[发明专利]一种核酸适配体分子印迹协同识别不锈钢网片的制备方法

说明书

本发明涉及一种核酸适配体分子印迹协同识别不锈钢网片的制备方法，包括以下步骤：(1)对不锈钢网片依次进行有机溶剂浸泡、碱洗、去离子水清洗和烘干处理；(2)用单宁酸对步骤(1)得到的不锈钢网片进行表面处理；(3)对步骤(2)得到的不锈钢网片进行硅烷化处理；(4)在4‑羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液中加入步骤(3)得到的不锈钢网片、模板分子与核酸适配体，然后依次加入功能单体、交联剂和引发剂进行聚合反应，去除模板分子，得到核酸适配体分子印迹协同识别不锈钢网片。本发明通过核酸适配体‑模板分子‑功能单体协同识别提高对配体模板分子的特异性识别能力，实现分子印迹与核酸适配体两种分子识别技术优势互补。

技术领域

本发明涉及材料制备及固相萃取领域，特别是涉及一种核酸适配体分子印迹协同识别不锈钢网片的制备方法。

背景技术

随着社会经济的发展，人们越来越重视食品安全问题。目前，约有四分之一的粮食谷物以及饲料中含有真菌毒素，这些真菌毒素不仅会对畜牧产业造成直接的经济损失，部分真菌毒素还对人体具有致畸性和致癌性，其可能通过食物进入人体并在体内慢慢积累，对人体健康造成极大的危害。比如赭曲霉毒素A(OTA)和伏马毒素B1(FB1)会对人体的肝脏产生损伤，长期作用会引发肝癌。我国规定在谷物及其制品中OTA的含量不得超过5.0μg/kg，在饲料原料及产品中不得超过100μg/kg。欧盟对伏马毒素B1(FB1)和伏马毒素B2(FB2)含量总含量具有以下规定，在玉米中不得超过4mg/kg，在婴幼儿玉米制品中不得超过0.2mg/kg。因此，实现食品中多种微量毒素的同时快速检测显得尤为重要。

目前国内外关于食品中毒素和抗生素的检测方法报道包括薄层色谱法，酶联免疫吸附法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等。薄层色谱法虽然简单，但存在灵敏度低和重现性差等缺点；酶联免疫法灵敏度高，特异性强，但由于酶自身稳定性不足，容易导致复杂基质样品检测出现假阳性；高效液相色谱法以及液质联用法具有灵敏度高和重现性好等优点，利用各组分保留时间的不同，可以同时检测多种目标物。

分子印迹聚合物的合成包括通过非共价键作用使模板分子与溶液中的功能单体络合，在交联剂和引发剂的作用下，功能单体逐渐在模板分子的周围聚合。聚合完成后，通过充分洗涤将模板分子除去，从而使结合位点(即空腔)可以和与模板分子在官能团的大小，形状和位置方面相似的物质结合。分子印迹具有稳定性好、制备简单等特点，但特异性识别能力比较差。

核酸适配体是一段含有20-100个核苷酸的RNA或DNA片段，可通过指数富集配体系统进化技术筛选得到，核酸适配体具有与抗体和酶相匹敌的特异性靶向能力，能够与小分子、蛋白质甚至细胞特异性结合。同时核酸适配体还具有抗体和酶所不具备的优点：可化学合成，易化学修饰，分子量小，与目标对象结合空间位阻小，目标配体范围广等。

完整的样品分析过程包括样品的收集，制备，分析，数据处理和结果报告。从环境、食品、临床标本或生物液体中采集的样品，通常含有复杂的化学成分，直接分析可能无法准确检测到含量较低的目标分析物。另一方面，样品中的杂质还可能会形成堵塞，对分析仪器产生损伤。样品前处理是整个分析过程中的关键步骤，直接影响样品分析的准确度和精密度。目前各类前处理技术普遍存在两极化发展趋势，即追求高选择性时其适用性大幅下降，追求方法适用性以实现高通量分析目的时，样品前处理方法的选择性较差。如何同时实现高选择性、高通量及不同样品的可定制化检测具有研究价值。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种核酸适配体分子印迹协同识别不锈钢网片的制备方法，在合成分子印迹聚合物的过程中加入核酸适配体，基于核酸适配体与分子印迹聚合物协同识别作用，通过核酸适配体-模板分子-功能单体协同识别提高对配体模板分子的特异性识别能力，同时通过在聚合物骨架结构中固载核酸适配体，增强核酸适配体稳定性，实现分子印迹与核酸适配体两种分子识别技术优势互补，实现高选择性识别目标物。

本发明采取的技术方案如下：

一种核酸适配体分子印迹协同识别不锈钢网片的制备方法，包括以下步骤：