[发明专利]一种GC-MS-SSDMC法同时测定油料中游离态甾醇及甾醇糖苷的方法

说明书

本发明公开了一种GC‑MS‑SSDMC法同时测定油料中游离态甾醇及甾醇糖苷的方法，包括，样品的提取、净化、衍生化、过滤及转换因子的计算。本发明实现了油料作物及食用油中菜油甾醇，豆甾醇，谷甾醇，环木菠萝烯醇，24‑亚甲基环木菠萝烷醇，菜油甾醇吡喃葡萄糖苷，豆甾醇吡喃葡萄糖苷，谷甾醇吡喃葡萄糖苷的同时定性定量分析，检测步骤简单，准确性高，灵敏度高，重复性好，适合批量检测，提高了检测效率，对指导食用油加工及其合理膳食利用提供了基础。

技术领域

本发明属于油料作物及食用油活性成分的提取及测定技术领域，具体涉及到一种GC-MS-SSDMC法同时测定油料中游离态甾醇及甾醇糖苷的方法。

背景技术

游离态植物甾醇作为一种天然活性物质，因有与胆固醇非常相似的结构，在体内可替代胆固醇分子在胆汁酸胶束中的位置，从而发挥良好的降胆固醇功效。除了降胆固醇作用，游离态植物甾醇还具备抗炎，抗氧化，调节身体糖脂代谢，改善神经退行性疾病症状等生理活性。植物甾醇糖苷是游离态植物甾醇的一种衍生物，研究发现其具备一定的降胆固醇及抗炎作用，但近年来的研究发现，植物甾醇糖苷也具备一定的神经毒性，可引起神经元变性、死亡及运动行为缺陷等症状。

食用油作为人类日常饮食不可缺少的一部分，是人类膳食植物甾醇的重要来源，各类油料作物作为食用油的主要来源，需经历不同的制油工艺方可达到可食用标准，不同制油工艺亦会对其内植物甾醇等活性物质含量及比例等造成一定影响，因此准确便捷地测定各类油料作物及食用油中游离态植物甾醇及甾醇糖苷的含量对更加合理加工各类油料作物及更加合理摄入食用油具有重要意义。

目前，国内外针对油料作物及食用油中植物甾醇的检测大多都需经历碱水解步骤，利用GC或GC-MS等分析设备，采用内标法用于计算总植物甾醇含量，这种方法通常未计入植物甾醇糖苷，且水解这一处理步骤会使大量植物甾醇酯水解成游离态植物甾醇，导致无法得知具体游离态植物甾醇的含量。也有研究通过预先利用柱色谱或平板分离的方式将各类植物甾醇预先分离，在各自进行水解，最后利用GC或GC-MS进行检测，该类方法由于需要预先将各目标物分离，因此在该过程中选取合适的洗脱剂或展开剂非常重要，但也非常繁琐及耗时，此外由于同样经历酸/碱水解步骤，无法得知甾醇复合物如甾醇糖苷的原本信息，只能得到其甾醇部分的信息。故现有方法由于需要经历水解步骤，不但繁琐且会使各物质原本信息丢失，某些成分结构发生改变，且不同形态植物甾醇的测定均需要独立进行的。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。

因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种GC-MS-SSDMC法同时测定油料中游离态甾醇及甾醇糖苷的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种GC-MS-SSDMC法同时测定油料中游离态甾醇及甾醇糖苷的方法，包括，称取磨粉后的油料作物，加入内标物5α-胆甾烷醇溶液，再加入氯仿与甲醇混合溶剂，超声提取2次，过滤，将滤液保留，滤渣再用正己烷进行同样的超声提取处理1次，合并提取液，并用旋蒸结合氮吹以除去其内有机溶剂，得提取目标物；

将提取目标物依次进行净化、衍生化和过滤后，注入进样瓶中待测；

将待测样品注入GC-MS中进行分析，对总离子流色谱图TIC中各目标物的特征离子进行提取，得到目标物的提取离子色谱图EIC，对EIC中各目标物的峰面积进行积分，并按以下公式计算各目标物的浓度：