[发明专利]一种快速筛选非转基因定点突变植物的方法

权利要求书

1.一种快速筛选非转基因定点突变植物的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将靶向特定基因靶位点的sgRNA导入含有正负筛选标记coda::nptii或hpt::coda的基因编辑载体中，上述基因编辑载体包括基因编辑元件、正负筛选标记以及农杆菌载体骨架片段；(2)以基因编辑载体为基础构建基因敲除载体并将其通过农杆菌转化需要处理的植株，实施转基因，并通过nptii或hygromycin进行正向筛选获得第一代含有转基因元件的基因定点突变材料；(3)种植步骤(2)中所获得的第一代突变体，并收获种子；(4)利用负向筛选标记codA，对所收获的种子进行筛选，最终获得不含转基因成分的基因定点突变材料；

所述正负筛选标记coda::nptii的序列如SEQ ID NO.1所示；

所述正负筛选标记hpt::coda的序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的快速筛选非转基因定点突变植物的方法，其特征在于，所述基因编辑元件为ZFNs、TALENs或CRISPR/Cas9。

3.根据权利要求2所述的快速筛选非转基因定点突变植物的方法，其特征在于，所述步骤(2)中构建的基因编辑载体中Cas9基因由35S启动子驱动，正负筛选标记为coda::nptii或hpt::coda，上述基因编辑载体适用于烟草、大豆或油菜。

4.根据权利要求2所述的快速筛选非转基因定点突变植物的方法，其特征在于，所述步骤(2)中构建的基因编辑载体中Cas9基因由Ec1.1启动子驱动，正负筛选标记为hpt::coda，上述基因编辑载体适用于拟南芥。

5.根据权利要求2所述的快速筛选非转基因定点突变植物的方法，其特征在于，所述步骤(2)中构建的基因编辑载体中Cas9基因由玉米Ubi-1启动子驱动，正负筛选标记为coda::nptii或hpt::coda，上述基因编辑载体适用于水稻、小麦、玉米或谷子。

6.根据权利要求1所述的快速筛选非转基因定点突变植物的方法，其特征在于，所述植物包括烟草、大豆、油菜、拟南芥、水稻、小麦、玉米或谷子。