[发明专利]一种基于肿瘤新生抗原的T细胞分选制备技术及其应用

权利要求书

1.一种基于肿瘤新生抗原的T细胞制备方法，其特征在于：该种基于肿瘤新生抗原的T细胞制备方法，包括以下步骤：

S1：采集肿瘤标本，基因测序分析肿瘤基因突变，通过手术、穿刺、介入等手段采集患者肿瘤组织；通过全外显子测序、探针回收法测序等方法测序检测基因突变；

S2：根据基因突变分析肿瘤新生抗原，根据基因突变、HLA亲和力、基因表达等信息分析肿瘤新生抗原；

S3：根据新生抗原制备新生抗原疫苗，根据新生抗原序列制备多肽或者RNA疫苗；

S4：采集患者外周血细胞，分离DC细胞和T细胞；

S5：用肿瘤新生抗原疫苗诱导刺激DC细胞，将多肽疫苗或者RNA疫苗转入DC细胞；

S6：用疫苗激活的DC细胞诱导T细胞的活化，制备新生抗原反应性T细胞，将DC细胞和T细胞共孵育，比例是1:1到1:10，孵育时间是1hr到24hr。

2.一种如权利要求1中任一项所述的基于肿瘤新生抗原的T细胞的分选方法，其特征在于：该基于肿瘤新生抗原的T细胞的分选方法，包括以下步骤：

S1:加载肿瘤新生抗原疫苗的DC和T细胞共孵育,将DC细胞和T细胞共孵育，比例是1:1到1:10，孵育时间是1hr到24hr；

S2:采用T细胞活化标记物分选T细胞,T细胞活化标记可以是CD69、CD137、CD27、TRAP/CD40L、CD134；

S3:对分选的T细胞扩大培养，培养方法包括采用正常人PBMC照射后用作饲养细胞扩增T细胞，或者CD3CD28磁珠法扩增T细胞，或者重组人纤维连接蛋白加CD3磁珠法扩增T细胞。

3.一种如权利要求1-2中任一项所述的细胞分选制备方法在抗肿瘤治疗中的应用，以及其在制备抗肿瘤药物中的应用。