[发明专利]一种保护氨基酸对映异构体检测方法

说明书

本发明公开了一种保护氨基酸对映异构体检测方法，包括以下步骤：S1、配制对映异构体对照品溶液；S2、配制供试品溶液；S3、利用液相色谱法进行检测，检测条件为：色谱柱：纤维素‑三(3,5‑二甲基苯基氨基甲酸酯)色谱柱；洗脱条件：采用等度洗脱；流动相：流动相A：三氟乙酸：水＝0.5‑1:1000；流动相B：乙腈等步骤。通过改进流动相的配方，用毒性较低，成本较低的乙腈替代正己烷、异丙醇，进而有效解决原检测方法中存在的流动相毒性大，检测成本高的问题，并且同时改进色谱检测条件，使流动相与色谱检测条件高度匹配，实现了主峰与对映异构体的有效分离，分离效果突出，专属性好，为提高保护氨基酸质量起到了积极作用。

技术领域

本发明涉及保护氨基酸对映异构体检测技术领域，特别涉及一种保护氨基酸对映异构体检测方法。

背景技术

随着多肽合成的发展，市场对保护氨基酸需求越来越大，同时对保护氨基酸的质量要求也越来越严苛，合成多肽的保护氨基酸绝大多数含有手性中心，对映异构体杂质引入肽链后，会形成结构、性质与目标产物相似的差向肽杂质，提纯难度较大，需利用有效地检测分析方法控制保护氨基酸中潜在的对映异构体杂质，并建立严格的质控要求。

对于保护氨基酸对映异构体的检测分析方法，工业应用上通常以正己烷、异丙醇、乙醇、三氟乙酸配制成流动相，通过高效液相色谱仪将保护氨基酸与对映异构体分离，以达到检测目的。然而，在该检测分析方法中，正己烷极易挥发，毒性强对检测人员伤害大，而且色谱级正己烷、异丙醇价格昂贵，导致保护氨基酸对映异构体检测成本高，企业成本投入大，为了保证主峰与对映异构体的分离，目前，并无合适的方法能够替代正己烷、异丙醇等物质使用，以降低检测成本。

发明内容

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种保护氨基酸对映异构体检测方法，通过改进流动相的配方，用毒性较低，成本较低的乙腈替代正己烷、异丙醇，进而有效解决原检测方法中存在的流动相毒性大，检测成本高的问题，并且，在改进流动相的同时，同时改进色谱检测条件，使流动相与色谱检测条件高度匹配，实现了主峰与对映异构体的有效分离，分离效果突出，专属性好，目标峰表现明显，易于判断、计算，为提高保护氨基酸质量起到了积极作用。

本发明采用的技术方案如下：一种保护氨基酸对映异构体检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、配制对映异构体对照品溶液，精密称取保护氨基酸对映异构体，用稀释剂溶解并稀释至刻度线，再精密称取保护氨基酸，用稀释剂溶解，然后加入适量的对映异构体溶液，再用稀释剂稀释至刻度线，得到对映异构体对照品溶液；

S2、配制供试品溶液，精密称取供试品，用稀释剂溶解并稀释至刻度线，得到供试品溶液；

S3、利用液相色谱法进行检测，检测条件为：

色谱柱：纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)色谱柱；

洗脱条件：采用等度洗脱；进样量：5-10ul；

流动相：流动相A：三氟乙酸：水＝0.5-1:1000；流动相B：乙腈；

流速：0.8-1.2ml/min；柱温：20-30℃；运行时间：25-30min；

S4、检测实验，采用一针空白溶液、一针对映异构体对照品溶液、两针供试品溶液的方式进入色谱系统，然后进行检测实验，通过面积归一法对主峰纯度和对映异构体进行计算，得到各组分的峰面积百分比。