[发明专利]一种KLP1

说明书

本发明提供了一种KLP1基因在提高植物抵抗灰霉菌侵染中的应用。本发明从番茄中分离和克隆到KLP1基因，构建了番茄KLP1基因敲除重组载体pTX‑KLP1、基因敲除重组菌株LBA4404‑pTX‑KLP1及其番茄KLP1基因敲除纯合株系，本发明证实了敲除KLP1基因可以有效提高番茄抗灰霉菌侵染的能力，并且番茄KLP1基因敲除株系与野生型株系相比，叶片上的病斑直径及叶片中的灰霉量均明显减小。本发明通过实验证实KLP1基因在提高番茄抗灰霉病方面具有应用价值，并为利用KLP1基因培育抗病植株奠定良好的理论和应用基础。

技术领域

本发明属于植物基因工程领域，具体涉及一种KLP1基因在提高植物抵抗灰霉菌侵染中的应用。

背景技术

番茄是我国重要的经济作物，由半知菌亚门葡萄孢属的灰葡萄孢真菌（又名灰霉菌）引起的番茄灰霉病是番茄生产中的重要病害之一，是威胁番茄生产的一种毁灭性的腐生型真菌性病害。灰葡萄孢不仅侵染番茄的果实，还会侵染番茄的茎、叶、花等不同的部位，且传播速度快，严重影响番茄的产量和经济效益。灰葡萄孢还有易变异和多型性的特点，容易受环境和寄主的影响而产生新的变异。目前对番茄灰霉病的防治主要是化学防治和农业防治，但防治效果均不理想，因此需要深入研究植物的的抗病机制及其与病原互作的分子机制，为通过基因工程手段控制番茄灰霉病的发生提供依据，从而为番茄灰霉病的防治提供新的思路。

Bet-v-1结构域是以桦树主要致敏原Bet v I命名的，具有该结构域的蛋白多属于植物病程相关蛋白家族10（PR-10），其在双子叶植物中广泛存在，大小约为15-17 kD。近几年，大量的含有Bet-v-1结构域的蛋白被鉴定，但是彼此之间的同源性都不高。其中，PR-10为木本植物主要的花粉致敏原以及水果、蔬菜、种子中主要的致敏原，其表达水平受病原侵染、机械损伤及非生物胁迫影响而变化；贯叶连翘间萘二蒽酮金丝桃素合成相关酶Hyp-1基因也属于PR-10家族；细胞分裂素特异结合蛋白、罂粟的主要乳胶蛋白及成熟相关蛋白均含有Bet-v-1结构域。

番茄KLP1蛋白为番茄特有的小分子蛋白，共812个核苷酸，编码147个氨基酸，该蛋白中具有保守的功能结构域Bet-v-1，但KLP1蛋白与PR-10家族之间存在很大的区别，比如KLP1蛋白分子量比PR-10家族小，且不含有PR-10家族蛋白保守的P-loop等，但目前番茄KLP1蛋白的生物学功能尚不明确。

发明内容

本发明提供了一种KLP1基因在提高植物抵抗灰霉菌侵染中的应用。本发明从番茄中分离和克隆到KLP1基因，构建了KLP1基因敲除重组载体pTX-KLP1及其纯合株系，并且证实了KLP1基因可以有效提高番茄抵抗灰霉菌侵染的能力。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种KLP1基因在提高植物抵抗灰霉菌侵染中的应用。

进一步的，所述KLP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步的，所述应用包括以下步骤：