[发明专利]一种四价流感病毒亚单位疫苗及其制备方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及一种四价流感病毒亚单位疫苗及其制备方法。所述的四价流感病毒亚单位疫苗，每剂含H1N1、H3N2和2种乙B型共四种，所述的四价流感病毒亚单位疫苗为经病毒接种、病毒增殖培养、尿囊液收获、澄清、灭活、超滤浓缩、裂解和超速离心纯化、混配、过滤除菌、分装和包装制备得到的，其中，所述的灭活为：先向单价病毒收获液中加入羧甲基葡聚糖溶液，再加入甲醛进行灭活。本发明方法降低了制得的四价流感病毒亚单位疫苗中游离甲醛的含量，延长了疫苗保存期，升高了疫苗免疫后抗体水平的产生。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及一种四价流感病毒亚单位疫苗及其制备方 法。

背景技术

流感是由流感病毒引起的，可造成大规模流行的人、禽畜共患的急性呼吸道传播疾病。 流行性感冒病毒分甲、乙、丙三型。其中，甲型致病力最强，可感染动物和人类并引起流 行甚至是世界范围内的大流行；乙型致病力稍弱，可引起局部流行。流感病毒经常发生抗 原漂移和抗原转移，逃避机体免疫系统的防御，这也是造成大流行的原因。流感病毒具有 高度传染性，通过飞沫经空气传播。经短暂潜伏期后，急起高热寒战，1-2日内体温可高达40℃，伴随全身乏力、头痛、肌痛、咽痛等症状，可引起肺炎、支气管炎、心肌炎、心 包炎等并发症，造成老年人、体弱者等高危人群的大量死亡，给社会带来巨大的损失。

市场上现有疫苗为流感全病毒灭活疫苗和流感病毒裂解疫苗，传统裂解疫苗纯化方法 为：澄清灭活的单价收获液经超滤浓缩、蔗糖密度区带离心法纯化、超滤除去蔗糖、裂解、 再次蔗糖密度区带离心法纯化，再次超滤除去蔗糖，除菌过滤，加入硫柳泵作为防腐剂。 工艺复杂，步骤繁琐，消耗大量的人力物力，增加微生物污染风险。

同时传统流感疫苗纯度不够且含有对人体有害的佐剂及防腐剂。佐剂虽然可以改善疫 苗的免疫应答，但代价是反应原性增加，甚至更严重。例如，老年人接种MF59佐剂流感疫苗后抗体水平提高了，但是接种后的局部反应更多了，在一项老年人的对照研究中，接种含佐剂疫苗的老年人与接种无佐剂的老年人相比，疼痛增加6倍，局部发红增加2倍， 乏力和肌肉痛等全身反应也增加了。另据报道，使用了丹麦Statens血清研究所生产的氢 氧化铝吸附的百白破疫苗，导致546例注射部位出现顽固性硬结性瘙痒的严重不良反应。 其中77％的不良反应病例经皮肤试验确认为对氢氧化铝过敏。目前，国家食品药品管理局 已禁止了氢氧化铝佐剂用于狂犬病疫苗的生产。硫柳泵一直被用做许多疫苗的防腐剂，不 过现在硫柳泵引起接触性皮炎、变应性结膜炎、耳毒性等毒副作用已经开始引起科研人员 的重视，现在已经在美国爱荷华州、加利福尼亚州、英国和其他欧洲国家禁止在儿童疫苗 中使用硫柳泵。

CN107537032A公开了一种四价流感病毒亚单位疫苗及其制备方法，该流感疫苗采用裂 解剂和新的纯化方法将裂解后的病毒蛋白进一步纯化，制成四价流感病毒亚单位疫苗，其 中每剂含甲1型(H1N1)、甲3型(H3N2)、2种乙型共四种流感血凝素含量在80％以上，不含佐剂、不含硫柳泵等防腐剂。本发明还提供了该流感疫苗的制备方法，包括以下步骤：病毒接种、病毒增殖培养、尿囊液收获、澄清、超滤浓缩、灭活、裂解和超速离心纯化、 凝胶过滤层析纯化(超滤)、混配、过滤除菌、分装、包装等步骤。本发明提供的流感病 毒亚单位疫苗可以提高流感疫苗的安全性，消除了佐剂带来的不良反应，消除了硫柳泵引 起的毒副作用。