[发明专利]脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法及测定方法

权利要求书

1.一种脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法，其特征在于，所述脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法包括：

第一步，以3×Tg-AD小鼠作为AD模型，10月龄3×Tg-AD雄鼠，随机分为模型组，实验组，以同月龄具有相同遗传背景的雄性C57BL/6J作为对照组；

第二步，AD模型注射携带PLTP基因增强型绿色荧光蛋白报告基因的腺相关病毒AAV-PLTP-EGFP，诱导PLTP的高表达；

第三步，对照组与模型组均注射不携带PLTP基因只携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的腺相关病毒AAV-EGFP。

2.如权利要求1所述的脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法，其特征在于，所述脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法10月龄3×Tg-AD雄鼠24只，随机分为模型组12只，实验组12只。

3.如权利要求1所述的脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法，其特征在于，所述脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法以同月龄具有相同遗传背景的雄性C57BL/6J作为对照组12只。

4.一种由权利要求1～3任意一项所述脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法构建的脑组织特异性PLTP过表达模型。

5.一种如权利要求4所述脑组织特异性PLTP过表达模型在治疗阿尔茨海默病靶点中的用途。

6.一种如权利要求4所述脑组织特异性PLTP过表达模型的测定方法，其特征在于，所述脑组织特异性PLTP过表达模型的测定方法包括：

第一步，以3×Tg-AD小鼠作为AD模型，构建脑组织特异性PLTP过表达模型；

第二步，观察PLTP过表达对3×Tg-AD小鼠学习记忆能力的影响；

第三步，病理学观察PLTP过表达对3×Tg-AD小鼠的保护作用；

第四步，观察PLTP过表达对Aβ及其生成相关蛋白的影响；

第五步，观察PLTP过表达对总Tau蛋白及其pTau蛋白的影响；

第六步，观察PLTP过表达对GSK-3β及GSK-3β的影响；采用western blot检测GSK-3β及GSK-3β的蛋白表达水平。

7.如权利要求6所述的脑组织特异性PLTP过表达模型的测定方法，其特征在于，所述第二步观察PLTP过表达对3×Tg-AD小鼠学习记忆能力的影响；小鼠侧脑室注射AAV-PLTP-EGFP病毒2周后，水迷宫实验与穿梭被动回避实验检测小鼠的学习记忆能力；水迷宫实验分为定位航行实验和空间探索实验两部分，以小鼠寻找平台的潜伏期、进入平台的次数为指标评价认知功能；穿梭被动回避实验在明暗穿梭箱中进行，以小鼠进入暗箱的潜伏期及在暗箱中的停留时间为指标，评价学习记忆能力。

8.如权利要求6所述的脑组织特异性PLTP过表达模型的测定方法，其特征在于，所述第三步病理学观察PLTP过表达对3×Tg-AD小鼠的保护作用；通过HE染色与尼氏染色检测各组病理学损伤，通过Aβ₁-42免疫组化染色观察各组老年斑SP的变化，通过Bielschowsky银染观察各组神经纤维缠结NFT的变化。

9.如权利要求6所述的脑组织特异性PLTP过表达模型的测定方法，其特征在于，所述第四步观察PLTP过表达对Aβ及其生成相关蛋白的影响；行为学实验后，处死小鼠，分离小鼠大脑皮质及海马，制备其组织匀浆，采用蛋白免疫印迹技术检测与Aβ生成相关蛋白APP、PS1、BACE1的表达水平；ELISA法检测Aβ_1-40及Aβ_1-42水平。

10.如权利要求6所述的脑组织特异性PLTP过表达模型的测定方法，其特征在于，所述第五步观察PLTP过表达对总Tau蛋白及其pTau蛋白的影响；采用western blot检测大脑皮质及海马总Tau蛋白及pTau蛋白在pSer199、pSer214、pThr231、pSer404四个磷酸化位点的蛋白的表达；

所述脑组织特异性PLTP过表达模型的测定方法的数据用SPSS16.0软件进行统计，多组样本间比较采用单因素方差分析ANOVO，P0.05时具有统计学差异。