[发明专利]脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法及测定方法

说明书

本发明属于PLTP过表达模型构建技术领域，公开了一种脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法及测定方法，10月龄3×Tg‑AD雄鼠，随机分为模型组，实验组，以同月龄具有相同遗传背景的雄性C57BL/6J作为对照组；AD模型注射携带PLTP基因增强型绿色荧光蛋白报告基因的腺相关病毒AAV‑PLTP‑EGFP，诱导PLTP的高表达；对照组与模型组均注射不携带PLTP基因只携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的腺相关病毒AAV‑EGFP。本发明的PLTP过表达可改善3×Tg‑AD小鼠的学习记忆能力、对3×Tg‑AD小鼠学习记忆能力的改善；通过促进GSK‑3β失活进而减少Aβ产生和Tau蛋白磷酸化有关。

技术领域

本发明属于PLTP过表达模型构建技术领域，尤其涉及一种脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法及测定方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是中枢神经系统退行性疾病，是痴呆最常见的类型。目前对于AD的研究国内外学者广泛关注，提出了多个致病机制学说，并研制出了有一定治疗效果的针对性药物，但其发病机制仍未完全阐明，尚缺少有效的治疗药物。磷脂转运蛋白(phospholipid transfer protein，PLTP)是一种广泛表达于中枢神经系统的糖蛋白，近年，体内、外研究发现，PLTP与AD密切相关。PLTP缺乏可促进老年小鼠认知功能的下降，那么PLTP高表达是否对AD具有改善作用，国内外研究还未见报道。多种方式可用于研究PLTP过表达对AD的影响，如给与重组的PLTP蛋白，但重组的蛋白价格昂贵，而且动物给药还要考虑药物是否能被吸收进入机体，能否透过血脑屏障进入脑组织发挥作用等，因此利用病毒作为载体，脑定位注射后，诱导PLTP基因高表达，进而引起PLTP蛋白表达上调是较为理想的技术，利用这种技术，再结合APP/PS1/Tau三转基因的AD小鼠，可以整体水平明确PLTP高表达对AD的保护作用。AD虽然是危害人类的重要疾病，但目前还未有完全能模拟人类AD的动物模型，这给AD机制及药物开发的研究带来了困难。而APP/PS1/Tau三转基因的AD小鼠目前是众多模型中相对较好的一种AD的模型，通过此模型对PLTP高表达的AD保护作用研究，能更加确证PLTP的抗AD作用。另外，Aβ与Tau都是AD发病过程中的关键分子，而PLTP高表达对两种分子都具有调控作用，也说明其有望成为临床抗AD的成分或靶点之一。而通过病毒介导的基因治疗在肿瘤治疗中已有应用，也时通过病毒介导基因表达的AD治疗具有一定可能性。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：PLTP缺乏可促进老年小鼠认知功能的下降，PLTP高表达是否对AD具有改善作用，国内外研究还未见报道。

解决以上问题及缺陷的难度为：侧脑室定位注射，腺相关病毒PLTP高表达基因的构建。

解决以上问题及缺陷的意义为：为临床以PLTP为靶点的AD治疗提供依据。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法及测定方法。

本发明是这样实现的，一种脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法，所述脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法包括：

第一步，以3×Tg-AD小鼠作为AD模型，10月龄3×Tg-AD雄鼠，随机分为模型组，实验组，以同月龄具有相同遗传背景的雄性C57BL/6J作为对照组；

第二步，AD模型注射携带PLTP基因增强型绿色荧光蛋白报告基因的腺相关病毒AAV-PLTP-EGFP，诱导PLTP的高表达；

第三步，对照组与模型组均注射不携带PLTP基因只携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的腺相关病毒AAV-EGFP。

进一步，所述脑组织特异性PLTP过表达模型构建方法10月龄3×Tg-AD雄鼠24只，随机分为模型组12只，实验组12只。