[发明专利]李斯特菌在筛选细胞呼吸链抑制药物上的应用

说明书

本发明公开了李斯特菌在筛选细胞呼吸链抑制药物上的应用。本发明采用李斯特菌作为细胞线粒体的替代，利用电化学方法能够快速、有效的完成细胞呼吸链抑制药物的筛选。

技术领域

本发明涉及一种用于细胞呼吸链抑制药物的筛选平台。

背景技术

呼吸链是由一系列的递氢反应和递电子反应按一定的顺序排列所组成的连续反应体系，它将代谢物脱下的成对氢原子交给氧生成水，同时有ATP生成。实际上呼吸链的作用代表着线粒体最基本的功能，呼吸链中的递氢体和递电子体就是能传递氢原子或电子的载体，由于氢原子可以看作是由质子和核外电子组成的，所以递氢体也是递电子体，递氢体和递电子体的本质是酶、辅酶、辅基或辅因子。

细胞呼吸链抑制对解决肿瘤乏氧，提高抗肿瘤效果具有重要的意义。呼吸链抑制后能够快速降低肿瘤细胞对氧气的消耗，同时降低对肿瘤的能量供应。但细胞呼吸链抑制药物的筛选比较麻烦，目前尚无简单有效的筛选方法。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种简单有效的细胞呼吸链抑制药物筛选方法。

为了达到上述目的，本发明提供了以下技术方案：

李斯特菌在筛选细胞呼吸链抑制药物上的应用。

具体的，李斯特菌在筛选细胞呼吸链电子传递抑制药物上的应用。

本发明还提供了一种细胞呼吸链抑制药物筛选方法，该细胞呼吸链抑制药物筛选方法通过监测药物对李斯特菌于导电基质中氧化还原电流的大小变化，判断药物对李斯特菌呼吸链抑制效果，从而筛选具有细胞呼吸链抑制作用的药物。

其中，导电基质采用DM溶液；并在进行药物对李斯特菌于细菌培养液中氧化还原电流的大小变化监测前，先将李斯特菌置于DM溶液中浸泡消除细菌原本存储的还原能力，再向其中通N₂除去溶解氧。

上述氧化还原电流大小变化的监测是通过采用电化学分析方法监测含李斯特菌的DM溶液的电子信号。

该电化学分析方法采用循环伏安法、电化学交流阻抗等方法。

本发明细胞呼吸链抑制药物筛选方法通过将不同浓度的药物加入含李斯特菌的DM溶液中，利用电化学三电极体系监测工作电极表面氧化还原反应，通过氧化还原电流的变化进行细胞呼吸链抑制效果的筛选：当氧化还原反应增加，则表明该药物对细胞呼吸链具有一定的抑制作用。

本发明还提供了一种细胞呼吸链抑制药物筛选平台，该细胞呼吸链抑制药物筛选平台包括电解杯、三电极体系和电化学工作站；所述电解杯通过三电极体系与电化学工作站相连；所述电解杯内置有李斯特菌的导电基质溶液。

其中，导电基质溶液采用DM溶液；三电极体系中工作电极采用玻碳电极/ITO电极，参比电极采用饱和甘汞电极，对电极采用铂丝电极。

DM溶液中每升含有：NaHCO₃ 2.5g，CaCl₂·2H₂O 0.09g，NH₄Cl 1.0g，MgCl₂·6H₂O0.2g，NaCl 10g，HEPES 7.2g，K₂HPO₄ 36mg，Na₂SO₄ 0.71mg，以及10ml微量矿物溶液；