[发明专利]一种模拟人体消化道酶解制备蛋白小分子肽的方法

权利要求书

1.一种模拟人体消化道酶解制备蛋白小分子肽的方法，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：

步骤1，将已洗净的新鲜动物骨头破碎成骨块，经由沸水蒸煮后，取骨块干燥粉碎后得干燥骨粉，加入蒸馏水调配至质量分数为20~30%的骨泥液；

步骤2，调节所述骨泥液的pH值至3.0~5.0，按所述干燥骨粉质量的0.5%加入木瓜蛋白酶和还原剂，在30~40℃下，辅以功率为200W的微波辐照，同时辅以功率为100~300W、频率为40~60kHz的超声波进行预酶解，得到预酶解液，其中所述木瓜蛋白酶的酶活力为80万U/g；

步骤3，将步骤2制得的所述预酶解液过滤、离心得到粗蛋白水解液；

步骤4，调节所述粗蛋白水解液的pH值至1.0~4.0，按所述干燥骨粉质量的0.1%~0.2%加入胃蛋白酶，并在40~50℃下辅以功率为100~300W，频率为40~60kHz的超声波进行一次酶解，得到一次酶解液；然后调节所述一次酶解液的pH值至7.0~8.5，按所述干燥骨粉质量的0.1%~0.2%加入糜蛋白酶与胰蛋白酶的混合酶，在30~40℃下辅以功率为100~300W，频率为40~60kHz的超声波进行二次酶解；待完成二次酶解后，调节pH值至中性得到二次酶解液，其中所述胃蛋白酶、糜蛋白酶与胰蛋白酶的酶活力均为20万U/g，所述糜蛋白酶与胰蛋白酶的质量比为1：1，超声波每工作10s间歇停止20s~40s；

步骤5，采用强酸型阳离子交换树脂和弱碱型阴离子交换树脂组成的混合床对所述二次酶解液进行脱盐处理，得到脱盐水解液；

步骤6，将所述脱盐水解液经超滤膜进行截留分离，收集分子量1kDa以下的多肽液进行喷雾干燥，得到蛋白小分子肽。

2.根据权利要求1所述的模拟人体消化道酶解制备蛋白小分子肽的方法，其特征在于，所述步骤2的具体步骤包括：

步骤2-1，调节所述骨泥液的pH值至3.0~5.0，按所述干燥骨粉质量的0.5%加入木瓜蛋白酶，同时加入还原剂，其中木瓜蛋白酶与还原剂的质量分数比为1：0.2~1；

步骤2-2，在30~40℃下，辅以功率为200W的微波辐照5min，同时辅以功率为100~300W、频率为40~60kHz的超声波对所述骨泥液预酶解20~40min，得到预酶解液，其中超声波每工作10s间歇停止20s~40s。

3.根据权利要求2所述的模拟人体消化道酶解制备蛋白小分子肽的方法，其特征在于，所述步骤4的具体步骤包括：

步骤4-1，调节所述粗蛋白水解液的pH值至1.0~4.0，按所述干燥骨粉质量的0.1%~0.2%加入胃蛋白酶，在40~50℃下辅以超声波酶解30~50min，得到一次酶解液；

步骤4-2，调节所述一次酶解液的pH值至7.0~8.5，按所述干燥骨粉质量的0.1%~0.2%加入糜蛋白酶与胰蛋白酶的混合酶，在30~40℃下辅以超声波酶解30~50min，得到二次酶解液，其中糜蛋白酶与胰蛋白酶的质量比为1：1；

步骤4-3，待完成二次酶解后，在90℃下灭酶10min，并调节pH值至中性得到二次酶解液。

4.根据权利要求2所述的模拟人体消化道酶解制备蛋白小分子肽的方法，其特征在于，所述步骤2-1中的所述还原剂为抗坏血酸或异抗坏血酸，且按每10万U酶活力的所述木瓜蛋白酶计，还原剂的添加量为25mg~125mg。

5.根据权利要求3所述的模拟人体消化道酶解制备蛋白小分子肽的方法，其特征在于，所述步骤1的具体步骤包括：

步骤1-1，将已洗净的新鲜动物骨头破碎成骨块，按1:2~3的料液比加入沸水蒸煮40-80min；

步骤1-2，去除蒸煮液表层油脂后，将骨块沥干并在80~90℃下干燥至含水量小于5%；

步骤1-3，将所述步骤1-2干燥的骨块依次进行粗粉碎、超微粉碎至粒径小于200目得到干燥骨粉；

步骤1-4，取所述步骤1-3的干燥骨粉，加入蒸馏水调配至质量分数为20~30%的骨泥液。