[发明专利]一种植物源神经酰胺提取物的精制纯化方法

权利要求书

1.一种植物源神经酰胺提取物的精制纯化方法，所述植物源神经酰胺为魔芋神经酰胺，其特征在于，包括以下步骤：

S1：取魔芋神经酰胺提取物粗品用乙醇溶液溶解，加入无机钠盐，用盐酸调pH至5-6，蒸发浓缩，待神经酰胺开始盐析时，冷却并静置于0-5℃环境下降温析晶8-12h，得到固体；过滤，收集滤饼；

S2：将上述过滤后的滤饼烘干干燥后用乙醇溶液在40-50℃下加热搅拌溶解，调整质量浓度为1-5%，并滴加盐酸调节pH至4-5；

其中，所用的乙醇溶液体积浓度为50-90%；

S3：初次吸附纯化：

在搅拌条件下向上述魔芋神经酰胺溶液加入羧基表面修饰的高分子磁性微球A，加入量为10-30wt%；缓慢搅拌1-2 h，使神经酰胺分子与高分子磁性微球A充分吸附；然后施加磁场作用10-20 min进行固液分离，将分离微球后的母液继续用磁性高分子微球重复吸附1-3次，合并高分子磁性微球A，室温下用去离子水洗涤，得到高分子磁性微球A-神经酰胺复合微球；

其中，所述的高分子磁性微球A为聚乙烯醇/聚甲基丙烯酸缩水甘油酯基复合基高分子磁性微球；

S4：将分离出的上述高分子磁性微球A-神经酰胺复合微球分散于适量石油醚中，在摇床震荡或快速搅拌条件下解吸15-30min，然后施加磁场分离出磁性微球A，并收集含有魔芋神经酰胺的石油醚溶液，蒸发回收溶剂得到神经酰胺组分；

S5：二次吸附:

将所得魔芋神经酰胺加入3-10倍质量的甲醇水溶液中，并滴加氢氧化钠调节pH至碱性；在搅拌条件下加入氨基化或胺基化表面修饰的高分子磁性微球B，缓慢搅拌吸附1-2h，然后在磁场作用下进行固液分离，收集磁性微球B，将分离微球后的溶液重复吸附1-2次，合并微球B，并在室温下用去离子水洗涤，得到高分子磁性微球B-神经酰胺复合微球；

其中，所述高分子磁性微球B为表面包覆介孔二氧化硅的磁性微球；

S6：将上述高分子磁性微球B-神经酰胺复合微球分散在75-90%体积比的乙醇溶液中，滴加盐酸调节PH至6-7，加入适量乙酸乙酯，快速搅拌或震荡10-15min，然后施加外部磁场分离磁性微球B，收集溶液；将磁性微球B按同样方法重复解吸1-2次，合并收集的溶液，旋蒸回收溶剂，所得固体在50-60℃下真空干燥；

S7：在水浴加热搅拌条件下，将干燥后的固体用适量丙酮使其恰好溶解，冷却至室温后，静置于0-2℃下析晶8-12h，得到白色晶体，过滤，烘干干燥，得到纯度99％以上的魔芋神经酰胺。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表面修饰的高分子磁性微球A通过如下步骤制备得到：

S1：制备磁性聚乙烯醇/聚甲基丙烯酸缩水甘油酯基微球：

将聚乙烯醇用去离子水加热溶解，沸水浴下加入纳米四氧化三铁磁性粒子和聚甲基丙烯酸缩水甘油酯，搅拌混匀，加入液体石蜡以及吐温搅拌；然后加入盐酸和戊二醛溶液，搅拌交联反应15-30min后，离心分离出微球，无水乙醇洗涤，真空干燥，得到磁性聚乙烯醇/聚甲基丙烯酸缩水甘油酯基微球；

其中，聚乙烯醇与四氧化三铁质量比为10:0.5-2；

其中，液体石蜡以及吐温的总质量为聚乙烯醇的10-30倍；

其中，戊二醛溶液的浓度为20-30wt%；

S2：表面羧基修饰：

将上述聚乙烯醇/聚甲基丙烯酸缩水甘油酯基微球分散于乙腈中，依次加入甲基丙烯酸、亚甲基双丙烯酰胺、偶氮二异丁腈，分散均匀，75-80℃水浴加热反应，反应完毕后磁场分离，无水乙醇洗涤，得到表面羧基修饰的高分子磁性微球A；

其中，聚乙烯醇/聚甲基丙烯酸缩水甘油酯基微球与乙腈的用量比为1g:5-20mL；

其中，水浴加热反应时间为4-8h。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1中聚乙烯醇与聚甲基丙烯酸缩水甘油酯质量比为10:1-3；步骤S2中，微球、甲基丙烯酸、亚甲基双丙烯酰胺、偶氮二异丁腈的质量比为10:3-5:0.1-0.5:0.1-0.3。