[发明专利]核酸的检测方法

权利要求书

1.一种方法，检测被检体中的RNA病毒，其特征在于，包括：

(1)使被检体悬浮于包含选自由内参DNA、和与该DNA特异性地杂交的正向及反向引物构成的组的至少一个要素的纯化水、生理盐水或缓冲液的工序；

(2)提取在工序(1)中得到的悬浮液的离心上清液的工序；

(3)将工序(2)中提取的离心上清液与被检体处理液混合的工序；

(4)将工序(3)中得到的混合液与一步法RT-PCR反应液混合，进行RT-PCR的工序，该一步法RT-PCR反应液包含逆转录酶以及DNA聚合酶且不包含在工序(1)中所选择的要素；以及

(5)检测所述RT-PCR产物的工序。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述被检体源自选自由生物试样、生物来源试样、环境试样以及环境来源试样构成的组的试样。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述被检体源自选自由排泄物试样、排泄物来源试样、呕吐物以及呕吐物来源试样构成的组的试样。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述RNA病毒是诺如病毒。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述诺如病毒的基因型为基因组I(GI)或基因组II(GII)。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述工序(3)中的被检体处理液包含1种以上的表面活性剂。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述表面活性剂是阴离子表面活性剂。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述阴离子表面活性剂选自下组：烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、多库酯、磺酸盐含氟表面活性剂、烷基苯磺酸盐、烷基芳基醚磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基羧酸盐、月桂酰基肌氨酸钠、羧酸盐含氟表面活性剂、胆酸钠及脱氧胆酸钠。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述阴离子表面活性剂是烷基硫酸盐。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述烷基硫酸盐是十二烷基硫酸钠或十二烷基硫酸铵。

11.如权利要求6～10的任一项所述的方法，其特征在于，所述表面活性剂的浓度为0.02～0.5％(w/v)。

12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述工序(3)中的被检体处理液包含氢氧化物。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述氢氧化物是氢氧化钠或氢氧化钾。

14.如权利要求12或13所述的方法，其特征在于，所述氢氧化物的浓度为10～100mM。

15.如权利要求1～14的任一项所述的方法，其特征在于，所述工序(3)中的离心上清液与被检体处理液的混合比作为体积比为1∶3～6。

16.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述工序(3)中的被检体处理液，是岛津制作所的产品编号241-09325系列的探针法诺如病毒检测试剂盒中包含的Sample TreatmentReagent。

17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述工序(4)中的一步法RT-PCR反应液，是岛津制作所的产品编号241-09325系列的探针法诺如病毒检测试剂盒中包含的NoVReagent A、B以及C的混合物，且是不包含在所述工序(1)中所选择的要素的混合物。