[发明专利]新城疫病毒感染HeLa细胞产生的外泌体纯化和检测方法在审
| 申请号： | 202010409254.4 | 申请日： | 2020-05-14 |
| 公开（公告）号： | CN111621480A | 公开（公告）日： | 2020-09-04 |
| 发明（设计）人： | 谭磊;丁铲;仇旭升;周昌娈;孙英杰;廖瑛;孟春春;宋翠萍;刘炜玮;于圣青 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心） |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09;G01N23/04;G01N15/02;G01N15/06;G01N33/68 |
| 代理公司： | 上海百一领御专利代理事务所(普通合伙) 31243 | 代理人： | 王奎宇;甘章乖 |
| 地址： | 201100 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 新城 疫病 感染 hela 细胞 产生 外泌体 纯化 检测 方法 | ||
1.一种exosome的纯化方法，其特征在于，所述的exosome是感染新城疫病的Hela细胞产生的；
所述的纯化方法依次包括下列步骤：
(1)将含有待测exosome的细胞上清液以10000g-12000g的速度离心20-35min；
(2)取上清以135000g-145000g的速度离心90-100min。
2.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(2)中的离心条件是速度为140000g，离心时间是90分钟。
3.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，将步骤(2)获得的细胞上清液再次以135000g-145000g的速度离心90-100min。
4.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，将步骤(2)离心后的细胞上清液转移至超速离心管内，设定140000g为离心速度，离心90min；
然后，弃上清加入PBS重悬沉淀，再次140000g离心90min；
最后，弃上清加入PBS重悬沉淀，即得到exosome样品。
5.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，将NDV感染的Hela细胞培养物以1000g-2000g的速度离心3-10min再取细胞上清液进行步骤(1)。
6.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述的纯化方法还包括exosome的检测步骤；
透射电子显微镜确定exosome形态；
exosome表面标志性蛋白确定；
和/或
exosome大小、浓度分析。
7.一种exosome的检测方法，其特征在于，该方法包括：
透射电子显微镜确定exosome形态；
exosome表面标志性蛋白确定；
和/或
exosome大小、浓度分析；
所述的exosome是NDV感染Hela细胞后分泌的exosome。
8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述的表面标志性蛋白是CD63蛋白。
9.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述的exosome的直径为50-200nm。
10.权利要求1至6之一所述的纯化方法的应用，其特征在于，所述的纯化方法用于分离、纯化NDV感染的Hela细胞产生的exosome。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心），未经中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心）许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
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