[发明专利]一种酶催化的（1S,5R）-双环内酯的合成方法

说明书

本发明属于生物制药技术领域，具体为酶催化的（1S，5R）‑双环内酯的合成方法。本方法包括：制备含拜尔‑维立格单氧化酶的工程菌；制备工程菌的静息细胞悬浊液，并经过超声破碎或者加压破碎后得含拜尔‑维立格单氧化酶细胞上清液，再与底物消旋取代双环[3.2.0]‑庚‑2‑烯‑6‑酮、氢供体、辅因子混合，进行不对称拜尔‑维立格氧化，制得（1S，5R）‑双环内酯；拜尔‑维立格单氧化酶的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示；该方法可催化外消旋的取代双环[3.2.0]‑庚‑2‑烯‑6‑酮(II)生成手性的（1S，5R）‑双环内酯，所用工程菌方便易得，产物便于分离且对映选择性高。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及酶催化的（1S，5R）-双环内酯（I）的合成方法。

背景技术

已知如式（I）所示的（1S，5R）-双环内酯是合成前列腺素的关键中间体：

式中R为氢，氟、氯、溴、碘等卤素，C₁-C₈烷基或环烷基，苯基，单取代或多取代芳基或芳烷基，噻吩基，呋喃基，萘基、吡啶基等。n为1~10。

其合成最早由Tolstikov, G. A.等（Zhurnal Organicheskoi Khimii, 1989,25, 208）报道，主要从环戊二烯出发，经过三步合成外消旋底物，然后与（R）- (+)- -甲基苄胺进行非对映体结晶拆分，再经内酯化得到所需要的（1S，5R）-双环内酯（I）。该方法存在着单次拆分率低，操作繁琐，成本偏高等拆分法的通病。

Veronique等（Tetrahedron Lett., 1989, 30, 3663）采用微生物促进的对映选择性Baeyer-Villiger氧化，从双环[3.2.0]-庚-2-烯-6-酮出发，一步构建（1S，5R）-双环内酯（I）。Furstoss等（J. Org. Chem., 1992, 57, 1306）用微生物促进立体选择性Baeyer-Villiger氧化，以高对映选择性（95%ee）得到内酯，但非正常内酯产物也以高ee值得到，且极性相近难以分离。

Masami等人描述了一种猪肝酯酶为催化剂对内消旋二酯的立体选择性水解制备（1S,5R）-双环内酯（I）的方法（Organic Reactions, NJ, United States, 37, No pp.given;1989）；Ogasawara等（Synlett,1996,319）报道了采用脂肪酶催化的不对称去对称化反应构建（1S，5R）-双环内酯（I）的方法。但这些方法存在生产规模小，后处理麻烦等缺点。

发明内容

本发明目的在于克服现有微生物催化技术不足而提供一种方便分离、高纯度且操作简单的（1S，5R）-双环内酯（I）合成方法。

本发明提供的酶催化的（1S，5R）-双环内酯的合成方法，具体步骤为：