[发明专利]一种制备CD106高表达间充质干细胞的方法、间充质干细胞及其应用和定向培养基有效
申请号: | 202010409889.4 | 申请日: | 2020-05-15 |
公开(公告)号: | CN111534484B | 公开(公告)日: | 2022-10-11 |
发明(设计)人: | 韩忠朝;张磊升;魏艺萌 | 申请(专利权)人: | 北京汉氏干细胞科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/0775 | 分类号: | C12N5/0775 |
代理公司: | 北京国帆知识产权代理事务所(普通合伙) 11334 | 代理人: | 刘小哲 |
地址: | 100176 北京市大兴区经济*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 制备 cd106 表达 间充质 干细胞 方法 及其 应用 定向 培养基 | ||
一种制备CD106高表达间充质干细胞的方法,包括,第一步骤S1,获取足量脐带间充质干细胞(UC‑MSCs),作为第一间充质干细胞;第二步骤S2,将所述第一间充质干细胞在定向培养基中培养,得到第二间充质干细胞,所述定向培养基至少包括,IL‑1β:5‑15ng/mL,IL‑4:5‑15ng/mL,IFN‑γ:10‑30ng/mL。本发明中第二间充质干细胞80%以上比例细胞为表达CD106的UC‑MSCs,且不影响间充质干细胞相关免疫标志分子的表达,尤其是HLA‑DR不表达;第二间充质干细胞的体外成脂、成骨、成软骨分化能力部分增强,并且具有更好的成血管和抑制淋巴细胞增殖的能力,移植后可以增强再生障碍性贫血疾病模型小鼠的造血重建。
技术领域
本发明总体涉及生物医药技术领域,更具体地,涉及一种制备CD106 高表达间充质干细胞的方法、间充质干细胞及其应用和定向培养基。
背景技术
间充质干细胞(mesenchymal stem/stromal cells,MSCs)具有造血支持和免疫调节的独特属性,并且在体外可定向诱导向成脂、成骨和成软骨分化,因此在组织修复和多系统疾病治疗中具有良好的应用前景。CD106,又称为血管细胞黏附分子-1(vascular celladhesion molecule-1,VCAM-1),作为一种跨膜糖蛋白,CD106的表达主要与免疫应答调节和促血管新生功能相关。
多种组织来源的MSCs均含有较低比例的CD106阳性细胞,例如骨髓、脐带、胎盘绒毛膜等。同时,在再生障碍性贫血骨髓来源的MSCs中, CD106含量异常低,存在多种生物学功能缺陷,尤其是免疫抑制功能显著降低。研究发现,高活性CD106阳性MSCs具有较强的免疫调节和促血管新生能力。因此,有效提高CD106在MSCs的表达丰度,将会使MSCs具有更强的免疫调节和促血管新生能力。
现有技术中记载,利用IL-1或IL-4均可刺激脐静脉血管内皮细胞系 HUVEC中CD106的表达(FEBS Letters 372(1995)194-198)。荷兰学者则利用IL-4和IFN-γ处理人的肺成纤维细胞,证实二者对于CD106的表达存在调控机制差异(Eur Respir J 1999;14:759–766)。2010年,Ren等学者发现,INF-γ刺激可促进小鼠骨髓来源间充质干细胞中CD106的表达,并进一步增强MSCs的免疫抑制功能,但是,采用上述方法时,或是整体CD106 的表达水平不高,或是生产效率低,或是会同时促进HLA-DR的表达丰度,导致影响免疫排斥方面的功能。
因此,提供一种制备间充质干细胞的方法,使CD106高表达且消除免疫排斥等副作用,是亟待解决的问题。
发明内容
为了解决上述问题,本发明提供了一种制备CD106高表达间充质干细胞的方法,包括,第一步骤S1,获取足量脐带间充质干细胞(UC- MSCs),作为第一间充质干细胞;第二步骤S2,将所述第一间充质干细胞在定向培养基中培养,得到第二间充质干细胞,所述定向培养基至少包括, IL-1β:5-15ng/mL,IL-4:5-15ng/mL,IFN-γ:10-30ng/mL。
根据本发明的一个实施方式,所述定向培养基至少包括IL-1β:10- 15ng/mL,IL-4:5-10ng/mL,IFN-γ:15-25ng/mL。
根据本发明的一个实施方式,所述定向培养基至少包括IL-1β: 10ng/mL,IL-4:15ng/mL,IFN-γ:15ng/mL。
根据本发明的一个实施方式,所述定向培养基至少包括IL-1β: 10ng/mL,IL-4:10ng/mL,IFN-γ:20ng/mL。
根据本发明的一个实施方式,所述第一步骤S1包括,将脐带间充质干细胞(UC-MSCs)扩增传代,采用第3-8代,融合度范围为30-40%的细胞作为所述第一间充质干细胞。
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