[发明专利]大黄酸与姜黄素联用延缓肾纤维化进程差异代谢物代谢通路及研究方法

说明书

本发明公开了一种大黄酸与姜黄素联用延缓肾纤维化进程差异代谢物代谢通路及研究方法，包括采用超高效液相色谱串联质谱检测NRK‑49F细胞纤维化和单侧输尿管结扎诱发的肾纤维化及大黄酸与姜黄素联用干预后的内源性代谢产物，获得指纹图谱；利用多元统计分析方法，从多个变量中筛选并鉴定出8显著发生变化的代谢物，作为与肾纤维化发生潜在相关差异代谢物；通过Metaboanalyst富集出与肾纤维化相关的3条代谢通路。本发明利用细胞和大鼠尿液代谢组学方法研究肾纤维化发生发展过程及大黄酸和姜黄素联用治疗过程中相关的内源性代谢变化，有助于揭示肾纤维化疾病发生发展机制，以及揭示治疗过程中联用所调控的异常代谢网络。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种大黄酸与姜黄素联用延缓肾纤维化进程差异代谢物代谢通路及研究方法。

背景技术

慢性肾病(chronic kidney disease，CKD)是一类慢性肾脏结构及功能障碍性疾病，是全球范围内的公共健康问题之一。近年来慢性肾病发病率估计在11％～13％，严重影响人体健康，同时给患者和社会带来了沉重的经济负担与压力。肾间质纤维化是各种肾慢性疾病发展到终末期的共同生理过程。研究发现，肾间质纤维化的成因复杂多样，例如肾成纤维细胞活化和增殖、上皮细胞-间充质的转换失衡等。预防和延缓肾间质纤维化是治疗慢性肾病的重要治疗策略。目前，临床上针对肾间质纤维化尚无特效药物，对其病程的评估主要采取创伤的肾活检。然而，活组织检查是一种侵入性手术，可导致严重的并发症，对医生的操作水平也要求较高。因此，如何对肾间质纤维化病程进行方便高效的早期诊断以及开发有效的治疗策略，是治疗慢性肾病的关键。

1999年由Nicholson教授首次提出代谢组学(metabonomics)概念，它被定义为定量测定生物系统对生理刺激以及基因改变产生的多参数代谢的动态应答。代谢组学分析是鉴定和量化给定样品中所有代谢物的过程，可以检测到单个样品中成百上千种代谢物，内源性和外源性代谢物均可通过代谢组学检测，使用代谢组学鉴定的多种代谢物被称为代谢组。代谢组学最早应用在筛选疾病的生物标志物研究，结合多元统计分析，可以将治疗组、疾病模型组和空白组的代谢轮廓可视化，分析代谢轮廓的变化以及辨识组间显著差异的内源性代谢物。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种大黄酸与姜黄素联用延缓肾纤维化进程差异代谢物代谢通路及研究方法，利用细胞代谢组学和尿液代谢组学方法研究肾纤维化及其治疗过程中相关的代谢变化，有助于揭示慢性肾病的发病机制，以及阐明治疗过程中大黄酸和姜黄素联用所调控的异常代谢网络。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种大黄酸与姜黄素联用延缓肾纤维化进程差异代谢物代谢通路及研究方法，包括：采用超高效液相色谱串联质谱检测NRK-49F细胞和单侧输尿管结扎(UUO)引发的大鼠肾间质纤维化及大黄酸和姜黄素联用的内源性代谢产物，获得UPLC指纹图谱；

利用PCA、OPLS-DA等模式识别方法，分别细胞和大鼠尿液中从多个变量中筛选并鉴定出3个和5个显著发生变化的内源性代谢物，作为肾纤维化发生潜在相关差异代谢物；

通过Metaboanalyst 4.0软件富集出肾纤维化及其治疗相关的3条代谢通路。

作为优选的，所述的大黄酸与姜黄素联用延缓肾纤维化差异代谢物代谢通路及研究方法中，获得大黄酸与姜黄素联用延缓肾纤维化的差异代谢物代谢通路的具体步骤如下：

(1)大黄和姜黄素的制备

将大黄酸(25mg/kg)和姜黄素(25mg/kg)溶解在CMC-Na制备。

(2)细胞和动物模型的确定