[发明专利]一种兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗，包括：抗原和佐剂，其特征在于：所述的抗原为重组兔出血症杆状病毒VP60蛋白，所述疫苗用于预防兔病毒性出血症。

2.根据权利要求1所述一种兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗，其特征在于：所述兔出血症病毒杆状病毒载体为重组兔出血症病毒VP60杆状病毒BAC-VP60株，保藏编号为：CCTCC V201833。

3.根据权利要求1所述一种兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗，其特征在于：所述疫苗是由重组兔出血症杆状病毒VP60蛋白灭活后制备获得，抗原按每毫升疫苗中含灭活前的VP60蛋白血凝效价不低于1:256的标准进行配苗。

4.根据权利要求1所述一种兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗，其特征在于：所述疫苗内含有佐剂，且佐剂为氢氧化铝胶，所述佐剂与抗原的比例为1：9。

5.根据权利要求1所述一种兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

步骤1：兔病毒性出血症生产用毒种制备：将毒种稀释后接种健康易感染的家兔，无菌采集接种后24 ~ 72h濒死或刚死亡的且具有典型病理变化的肝脏组织经检验合格后，保存作为生产用毒种备用；

步骤2：兔出血症病毒杆状病毒载体细胞培养物灭活液的制备：取生产用毒种进行细胞接种，无菌条件下称量采毒的肝脏组织，加适量的pH7.2磷酸盐缓冲液或生理盐水进行捣碎或研磨、过滤后得组织悬液，按组织悬液总量的0.1%~0.5%加入甲醛溶液，充分混合后装入无菌容器中，密封后置37°C环境下灭活48h,得到兔出血症病毒杆状病毒载体细胞培养物灭活液，并进行灭活检验、血凝价检验及病毒含量测定；

步骤3：兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗的配制：抗原含量按每毫升疫苗中含灭活前的VP60蛋白血凝效价不低于1:256的标准进行配苗，先将佐剂加入配苗乳化罐内，然后加入兔出血症病毒杆状病毒载体细胞培养物灭活液，1500~3000rpm搅拌5-10min，使其充分混合乳化，既得兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗。

6.根据权利要求5所述一种兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤2中的接种细胞为Sf9细胞，所用培养基为昆虫细胞培养基，重组兔出血症病毒VP60杆状病毒接种量为培养基总量的1%，培养条件为温度27～28°C、pH值为6.0～6.2、溶氧(DO)50%～60%、搅拌转速50～70r/min；当病变细胞达85%以上即可收获细胞培养物。

7.根据权利要求5所述一种兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤2获得兔出血症病毒杆状病毒载体细胞培养物灭活液之后，需进行血凝效价测定，细胞培养物对1%人“O”型红细胞凝集效价应不低于1:512。

8.根据权利要求5所述一种兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤2中，使用甲醛溶液对收获的细胞培养物进行灭活处理；并对灭活后的兔出血症病毒杆状病毒载体细胞培养物灭活液进行灭活检验：灭活液接种细胞后无细胞病变，红细胞凝集效价测定无血凝性。