[发明专利]一种抗自切和高比活力胰蛋白酶突变体有效
| 申请号： | 202010414080.0 | 申请日： | 2020-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN111676211B | 公开（公告）日： | 2022-07-19 |
| 发明（设计）人： | 王洪彬;路福平;曾芳;冯永蕊 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N9/76 | 分类号： | C12N9/76;C12N15/57;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 栗华楠 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 活力 胰蛋白酶 突变体 | ||
【权利要求书】：
1.一种抗自切胰蛋白酶突变体，其特征在于，是在SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的基础上发生以下突变中的一种获得的：R107L/R115S/K133A/K147D、R107L/R115S/K133A/K147D/K157E、R107L/R115S/K133A/K147D/K157E/K208P/K210A。
2.权利要求1所述蛋白酶突变体的编码基因。
3.一种包含权利要求2所述基因的重组载体或重组菌株。
4.如权利要求3述的重组载体，其特征在于，表达载体为pPIC9K。
5.如权利要求3所述的重组菌株，其特征在于，宿主细胞为毕赤酵母GS115。
6.采用权利要求5所述重组菌株生产胰蛋白酶的方法，其特征在于，具体如下：
（1）重组毕赤酵母摇瓶发酵
接种菌株在YPD液体培养基，28℃，200 rpm 培养24 h；以2%的接种量接种YPD液体培养基培养好的种子液至BMGY培养基，28℃，200 rpm 培养至菌液OD600为2-6，收集菌体；转移至BMMY培养基，添加甲醇至终浓度为0.5%；随后每12 h 添加终浓度为0.5%的甲醇诱导培养96h；
（2）胰蛋白酶原的激活
离心收集发酵液上清，调节pH至7.5，添加肠激酶，孵育以激活胰蛋白酶原；
（3）胰蛋白酶的纯化。
7.如权利要求1所述胰蛋白酶突变体在食品加工、皮革加工、医药领域非治疗目的的应用。
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