[发明专利]一种用于新型冠状病毒检测的酶标记的抗原、制备方法及试剂盒与应用

权利要求书

1.一种酶标记的2019-nCoV抗原，其特征在于：采用高碘酸钠氧化法将2019-nCoV抗原与酶进行偶联得到，所述的酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶，所述2019-nCoV抗原包括氨基酸序列为SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：4所示的4种合成多肽，所述2019-nCoV抗原中的4种合成多肽的质量比为(0.5-2)：(0.5-2)：(0.5-2)：(0.5-2)。

2.一种制备权利要求1所述的酶标记的2019-nCoV抗原的方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤A、酶活化；

a1、配制5-10mg/mL酶溶液；

a2、配制10-20mg/mL过碘酸钠溶液；

a3、将上述a1和a2配制溶液按体积比1：(1-3)混匀，室温避光反应0.5-2h；

a4、配置浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与步骤a3配制溶液以1：(1-2)的体积混合，常温避光反应0.5-2h，活化完成；

步骤B、酶标记2019-nCoV抗原：

b1、将2019-nCoV抗原与步骤A活化的酶按摩尔比1:(1-3)进行混合，避光37℃反应8-12h；

b2、配置浓度为2-5mg/mL的NaBH₄水溶液，按1mg酶加80μL配制好的NaBH₄水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应1-2h，得标记液；

b3、将上述步骤b2完成的标记液用0.01-0.05M PBS于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存；

步骤C：用酶稀释液将步骤B制得的酶活化标记2019-nCoV抗原稀释至工作浓度0.01-0.5μg/mL，并加入5-20％酶稳定剂，储存于2-8℃。

3.一种新型冠状病毒的检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括权利要求1所述的酶标记的2019-nCoV抗原，还包括2019-nCoV抗原包被的固相载体。

4.根据权利要求3所述的新型冠状病毒的检测试剂盒，其特征在于：所述固相载体为微孔板，所述包被2019-nCoV抗原的微孔板的制备方法包括如下步骤：

将2019-nCoV抗原用0.02-0.1M磷酸盐缓冲液稀释至1～5μg/mL，同时加入到96孔白色不透明塑料微孔板中，37℃包被2-4小时；弃去孔内液体，用pH7.4 PBS缓冲液洗板，然后加入含质量浓度0.2-1％BSA的磷酸盐缓冲液封闭微孔板，2-8℃封闭16-24小时；弃去孔内液体，甩干后于37℃烘干20-24小时；装入铝箔袋，加入干燥剂，封口，贴标签，储存于2～8℃。

5.根据权利要求3所述的新型冠状病毒的检测试剂盒，其特征在于：所述固相载体为磁性颗粒，所述包被2019-nCoV抗原的磁性颗粒的制备方法包括如下步骤：

取100mL 0.05-0.5M羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液，加入50-100mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌0.5-2h，之后加入10-40mg的2019-nCoV抗原，然后加入EDC，其浓度为5-10mg/mL，2-8℃反应1h后，用0.01-0.05M PBS缓冲液洗涤3次，最后用0.01-0.05MPBS定溶至1L。

6.根据权利要求3所述的新型冠状病毒的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括稀释液，当酶为碱性磷酸酶时，所述稀释液包括如下组分：1-5g/LTris、10-20g/LNaCl、1-5g/L CaseinNa、1-5mL/L吐温20、1-5mL/L ProClin^TM300，2-10mL/L硫酸庆大霉素；用pH计测定其pH值，用6M HCl或2M NaOH调整pH值在8.0±0.2范围内。