[发明专利]一种用于新型冠状病毒检测的酶标记的抗原、制备方法及试剂盒与应用

说明书

本发明创造提供了一种用于新型冠状病毒检测的酶标记的抗原、制备方法及试剂盒与应用，采用高碘酸钠氧化法将2019‑nCoV抗原与酶进行偶联得到。本发明创造所述的试剂盒与现有核酸检测试剂盒相比具有操作简便，速度快，成本低，对实验室要求低等特点。

技术领域

本发明创造属于免疫分析医学领域，尤其是涉及一种用于新型冠状病毒检测的酶标记的抗原、制备方法及试剂盒与应用。

背景技术

冠状病毒属于单股正链RNA病毒，既往已知感染人的冠状病毒有6种，即HCoV-229E、HCoV-OC43、SARSr-CoV、HCoV-NL63、HCoV-HKU1和MERSr-CoV。新型冠状病毒(2019-nCoV)属于第7种。

新型冠状病毒肺炎是一种急性感染性肺炎，其病原体是一种先前未在人类中发现的新型冠状病毒，即2019新型冠状病毒。经呼吸道飞沫和密切接触传播是主要的传播途径，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况中存在经气溶胶传播的可能。患者初始症状多为发热，乏力和干咳，并逐渐出现呼吸困难等严重表现。多数患者预后良好，部分严重病例可出现急性呼吸窘迫综合征或脓毒症休克，甚至死亡。

目前临床实验室的检测方法主要依靠核酸检测，但核酸检测要在有条件和资质的实验室进行，存在检测时间长、样本采集要求高、步骤多、场地和设备要求高等不足，难以大规模开展。双抗体(原)夹心法，通常是结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。加入酶标记的抗原或抗体，通过反应也结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据呈色的深浅进行定性或定量分析。酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。目前还没有应用上述双抗体(原)夹心法来检测新型冠状病毒的试剂盒。

发明内容

有鉴于此，本发明创造旨在提出一种用于新型冠状病毒检测的酶标记的抗原、制备方法及试剂盒与应用，避免了核酸检测试剂假阴性、操作繁琐等缺点，且解决了通量低，对检测环境和人员要求较高，成本高的缺陷。实现了大范围推广，流行病学调查，提升核酸检测的准确率，实现疑似病例鉴定和密切接触人群的普筛，结合核酸检测，降低漏检和错检率、多种检测试剂盒满足不同级别医院对新型冠状病毒的灵敏、快速和高通量检测需求。

为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：

一种酶标记的2019-nCoV抗原，采用高碘酸钠氧化法将2019-nCoV抗原与酶进行偶联得到，所述的酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶，所述2019-nCoV抗原为氨基酸序列为SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：4所示的4种合成多肽或包括氨基酸序列为SEQ ID NO：1至SEQID NO：4所示的4种合成多肽的氨基酸序列的重组抗原，具体如表1所示。

表1多肽的氨基酸序列

2019-nCoV抗原中的2019-nCoV重组抗原可以为SEQ ID NO：5至SEQ ID NO：10所示的重组抗原，具体如表2所示。

表2重组抗原的氨基酸系列信息

制备上述酶标记的2019-nCoV抗原的方法，包括如下步骤：

A、酶活化；

a1、配制5-10mg/mL酶溶液；

a2、配制10-20mg/mL过碘酸钠溶液；

a3、将上述a1和a2配制溶液按体积比1：(1-3)混匀，室温避光反应0.5-2h；