[发明专利]一种利用发根农杆菌诱导产生玫瑰毛状根的方法

权利要求书

1.一种利用发根农杆菌诱导产生玫瑰毛状根的方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）发根农杆菌保存、活化与侵染液的制备；

（2）外植体的预培养和共培养；

（3）农杆菌侵染诱导毛状根；

（4）毛状根液体增值培养。

2.根据权利要求1所述的一种利用发根农杆菌诱导产生玫瑰毛状根的方法，其特征是，步骤（1）中，侵染液的制备：

在无菌条件下，接种根癌农杆菌ATCC15834活化菌液50μL于50mL YEB液体培养基中，28°C 、200 rpm震荡培养至OD600=0.5；

取菌液5000 rpm离心5~10 min后去上清，加入等体积的1/2MS液体培养基，重悬混匀，置于28°C、100~110 rpm摇床震荡培养20~30 min后得到侵染液。

3.根据权利要求1所述的一种利用发根农杆菌诱导产生玫瑰毛状根的方法，其特征是，步骤（2）中，外植体的预培养和共培养：

在无菌条件下，将玫瑰组培苗幼嫩叶片切成0.6cm²的小块，背面向上于固体培养基培养2d后；浸入菌液轻摇5~20 min，吸干表面菌液后置于固体培养基上暗培养2~3 d。

4.根据权利要求1所述的一种利用发根农杆菌诱导产生玫瑰毛状根的方法，其特征是，步骤（3）中，毛状根的诱导：

将共培养叶片进行洗菌，置于附加300mg/L特美汀的培养基，在25±2℃黑暗条件下诱导培养一周，转入添加200 mg/L特美汀的除菌培养基中，7~9天转接一次，依次降低浓度，直至完全无菌，20d后诱导出的毛状根。

5.根据权利要求1所述的一种利用发根农杆菌诱导产生玫瑰毛状根的方法，其特征是，步骤（4）中，毛状根液体增殖培养：

将诱导至3~5cm毛状根的根株切下培养，挑选生长迅速、根系粗壮、分支较多、无向地性的毛状根转移到液体培养基中，25℃、120rpm黑暗中震荡进行扩大培养，获得大量生长的毛状根。