[发明专利]一种有效获取大花序桉无菌幼化芽的方法

说明书

本发明公开了一种有效获取大花序桉无菌幼化芽的方法，包括优树选择、水培促萌、外植体采集及处理、诱导培养和幼化培养工序，选择大花序桉优树，在优树中上部选取直径3‑4cm，完全木质化且带潜伏芽的枝条，带回培养室进行水培，待潜伏芽萌发并生长至3‑4cm时，剪取茎段作为外植体并进行消毒后，接种于诱导培养基中进行诱导培养，将获得的大花序桉初始芽接种到幼化培养基上进行幼化培养，最后获得生长健壮、活力旺盛的大花序桉无菌幼化芽。本发明的外植体获取率高，获得的无菌幼化芽生长健壮、活力旺盛，为后续的继代培养、生根培养打下了坚实的基础，满足大花序桉的规模化生产。

技术领域

本发明属于林业科学中的林木组织培养育苗技术领域，涉及桉树组培方法，尤其是涉及一种有效获取大花序桉无菌幼化芽的方法。

背景技术

大花序桉（Eucalyptus cloeziana）为桃金娘科桉树属大乔木树种，自然分布于澳大利亚昆士兰州中部和北部，原产地树高35～40m，最高可达40～55m，胸径可达1～2m。该树种生长迅速，干形通直、圆满，自然整枝良好。9年生开始开花结实，花期长，从花芽形成至成熟果实约需16个月。木材黄褐色，纹理通直，结构均匀，沉重、坚固、硬度高、耐久，在巴西有“桃花心木”之尊称，为高贵木材之意，是一种很好的锯材，可用于高级家具、实木地板、机械构件、建筑、矿柱、坑木等。

利用植株嫩茎直接诱导无菌芽是桉树工厂化组培苗生产的主要途径，桉树具有很强的萌芽再生能力，伐根上具有很多休眠芽或不定芽，尤其是幼、中龄林，半木质化带潜伏芽的萌芽条是桉树组培最佳外植体选择。专利号为201510976324.3的发明专利公开了一种大花序桉的组培快繁方法，该方法采用大花序桉优良家系的优良单株，伐倒后促生萌芽，利用萌芽作为外植体，以带有潜伏芽的茎段离体诱导无菌芽，无菌芽的获得，不经过愈伤组织成苗途径，而直接由外植体茎段萌生侧芽或不定芽，经过无菌芽进行继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。该发明采用了伐桩萌芽作为外植体材料，优树是林木高世代改良的重要遗传资源应就地保存，大花序桉与大部分的桉树树种不同，更新效果较差，环割萌芽率不足5%且易导致植株死亡，伐桩萌芽率不足20%且个体间差异显著，常常存在优树伐倒后不萌芽的情况，已经萌发的萌芽条在生长过程中也容易死去，大花序桉环割促萌或伐桩促萌不仅效率低而且容易造成重要遗传资源的损失，然而直接以树干上枝条的嫩芽为外植体进行组织培养诱导萌芽率低且因萌动芽继承了母体的生理年龄而不能直接进行继代培养，幼化技术困难，大花序桉内生菌也经常导致仅有的萌动芽污染死亡，因此，高效安全获取大花序桉无菌幼化芽较难，影响下步工作的顺利开展，难以进行规模化生产。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种有效获取大花序桉无菌幼化芽的方法，克服大花序桉无性繁殖困难的缺陷，满足大花序桉的规模化生产。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种有效获取大花序桉无菌幼化芽的方法，包括优树选择、水培促萌、外植体采集及处理、诱导培养和幼化培养工序，选择大花序桉优树，在优树中上部选取直径3-4cm，完全木质化且带潜伏芽的枝条，带回培养室进行水培，待潜伏芽萌发并生长至3-4cm时，剪取茎段作为外植体并进行消毒后，接种于诱导培养基中进行诱导培养，将获得的大花序桉初始芽接种到幼化培养基上进行幼化培养，最后获得生长健壮、活力旺盛的大花序桉无菌幼化芽；

主要操作步骤如下：

（1）优树选择

选择样地内树高、胸径、单株材积等生长指标前5%，且无病虫害、干形通直、分枝小的大花序桉个体为优树；

（2）水培促萌

选择优树中上部直径3-4cm，完全木质化且带潜伏芽的枝条，剪取60cm长去除叶片，带回培养室进行水培，每隔4天用体积浓度为2%的绿茶提取物对枝条进行一次喷洒杀菌；

（3）外植体采集及处理