[发明专利]一种桉树组培外植体制备及无菌芽诱导方法

说明书

本发明公开了一种桉树组培外植体制备及无菌芽诱导的方法，包括优树选择，环割促萌，水培促萌，外植体处理和诱导培养工序，选择桉树优树，在离地面20‑25cm处进行环割促萌，待萌芽条生长至直径2‑3cm时，剪取60cm长、完全木质化且带潜伏芽的枝条在培养室中进行水培，待潜伏芽萌发并生长至3‑4cm时，剪取茎段作为外植体并进行消毒后，接种于诱导培养基中，置于适宜的环境中进行诱导培养，最后获得生长健壮、活力旺盛的桉树无菌芽。本发明降低桉树组培外植体诱导污染率，无菌芽获取率高。

技术领域

本发明属于植物繁殖技术领域，涉及组织培养育苗技术，尤其是一种树组培外植体制备及无菌芽诱导方法。

背景技术

桉树是桃金娘科(Myrtaceae)杯果木属(Angophora)、伞房属(Corymbia)和桉属(Eucalyptus)3个属树种的统称，共有808个种和137个亚种或变种，共计945个分类群。天然分布华莱士线以东，北纬7°至南纬43°39′。除剥桉分布在巴布亚新几内亚、印度尼西亚和菲律宾，尾叶桉、山地尾叶桉和维塔尾叶桉分布于印度尼西亚帝汶岛及东部岛屿外，其余全部自然分布于澳大利亚。

大多数桉树易于无性繁殖，我国从1980年起，对重要桉树纯种、杂交种进行了扦插、组培试验，均取得成功，尤其在桉树组织培养方面更为突出，以尾巨桉芽器官为外植体进行组织培养，可不经愈伤组织直接繁殖成苗，并且年繁殖系数达3.512。桉树组培苗工厂化生产在我国南方发展较快，快繁技术日趋成熟，但外植体诱导阶段的污染率较高，无菌芽的获取效率较低，造成经济损失较大，因此如何克服污染问题是不可忽视的技术环节。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种能降低桉树组培外植体诱导污染率，无菌芽获取率高的桉树组培外植体制备及无菌芽诱导方法。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种桉树组培外植体制备及无菌芽诱导的方法，包括优树选择，环割促萌，水培促萌，外植体处理和诱导培养工序，选择桉树优树，在离地面20-25cm处进行环割促萌，待萌芽条生长至直径2-3cm时，剪取60cm长、完全木质化且带潜伏芽的枝条在培养室中进行水培，待潜伏芽萌发并生长至3-4cm时，剪取茎段作为外植体并进行消毒后，接种于诱导培养基中，置于适宜的环境中进行诱导培养，最后获得生长健壮、活力旺盛的桉树无菌芽；主要的操作步骤如下：

（1）优树选择

选择样地内树高、胸径、单株材积等生长指标前5%，且无病虫害、干形通直、分枝小的桉树个体为优树；

（2）环割促萌

铲除优树周围杂灌，环割前一天于优树周围喷晒75%酒精进行消毒，在优树离地面20-25cm处进行环割树周长的3/4，环割宽度2 cm，剥皮并刮尽形成层至韧皮部；

（3）水培促萌

待萌芽条生长至直径2-3cm时，剪取60cm长、完全木质化且带潜伏芽的枝条，去除叶片，带回培养室进行水培，每4天喷洒一次体积浓度2%的绿茶提取物抑菌；

（4）外植体处理

待潜伏芽萌发并生长至3-4cm时，剪取2-3cm茎段作为外植体，将外植体用75%酒精浸泡15s，无菌水清洗2-3次，然后用2%次氯酸钠浸泡1min，最后用无菌水清洗2-3次，用滤纸吸干，备用；

（5）诱导培养

将步骤（4）处理好的外植体接种到诱导培养基上进行诱导培养，暗培养7d后，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度1500-2000lux条件下培养20-25d，获得生长健壮、活力旺盛的桉树无菌芽。

作为进一步技术改进，以上步骤（3）所述的水培的培养基包括以下组分：每1L培养基中含50mg绿茶提取物，2.5mg核黄素（VB2），其余为纯水。