[发明专利]一种表面偶联S蛋白的外泌体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种表面偶联S蛋白的外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将SEQ ID No.1所示的DNA片段经Pme1酶切后插入到pWPI载体中，形成重组载体pWPI-S-RBD-SD-CP05；

2)将所述重组载体pWPI-S-RBD-SD-CP05和psPAX2、pMD2.G共同转染真核细胞，包装成慢病毒；

3)将所述慢病毒感染真核细胞后，筛选绿色荧光蛋白阳性的细胞继续培养，建立稳转细胞株；

4)将所述稳转细胞株经培养，裂解细胞，分离含CP05-S蛋白的蛋白裂解液；

5)将所述含CP05-S蛋白的蛋白裂解液和人血浆混合孵育，提取外泌体，得到表面偶联S蛋白的外泌体。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1)中DNA片段包含编码CP05-S蛋白的核苷酸序列；所述编码CP05-S蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2)中所述真核细胞包括293细胞。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤5)中所述含CP05-S蛋白的蛋白裂解液和人血浆的体积比为0.8～1.2:0.8～1.2。

5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤5)中所述孵育的温度为23～28℃；所述孵育的时间为50～70min。

6.根据权利要求1～5任意一项所述制备方法，其特征在于，步骤5)中所述提取外泌体的离心力为80000～120000g，所述提取外泌体的离心时间为4～5h。

7.权利要求1～5任意一项所述制备方法制备的偶联S蛋白的外泌体。

8.权利要求7所述偶联S蛋白的外泌体在制备抗新型冠状病毒的疫苗中的应用。

9.一种新型冠状病毒感染的抑制剂，其特征在于，包括权利要求7所述偶联S蛋白的外泌体。