[发明专利]一种表面偶联S蛋白的外泌体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种表面偶联冠状病毒S蛋白的外泌体及其制备方法和应用，属于生物制药技术领域。通过瞬时转染人细胞或重组慢病毒感染得到稳定细胞株实现适配体CP05‑S蛋白重组表达，与人血浆混合孵育，外泌体通过表面CD63膜分子与适配体CP05结合，形成表面偶联S蛋白的外泌体。本发明采用外泌体呈递抗原S蛋白，使制备的疫苗，避免了免疫佐剂的毒性和病毒疫苗感染的风险，是理想的疫苗研制策略，也是病毒入侵途径封闭的理想策略。同时通过外泌体递送S蛋白，可以竞争抑制新冠病毒的S蛋白与受体结合，发挥封闭作用，有效阻断新冠病毒入侵，因此偶联S蛋白的外泌体作为新型冠状病毒感染的抑制剂，可能用于急性期新冠肺炎的治疗。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种表面偶联S蛋白的外泌体 及其制备方法和应用。

背景技术

目前临床上对新冠肺炎的治疗没有确认的有效的抗病治疗方法， 可以使用α-干扰素、蛋白酶抑制剂或加核苷酸利巴韦林，但是上述治 疗策略具有一定局限性，除对孕妇和儿童及老年人慎重使用外，还对 干扰素及辅料过敏的患者、患身免疫性疾病的患者、心脏、肝病、肾 功能不全或骨髓功能不正常的患者以及患有癫痫及中枢神经系统功 能损伤者均不适用。因此开发新的治疗新冠病毒的药物的任务十分紧 迫。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种表面偶联S蛋白的外泌体及其制 备方法和应用，所述外泌体具有较好的抗原提呈效果，具有理想免疫效果。

本发明提供了一种表面偶联S蛋白的外泌体的制备方法，包括以下步 骤：

1)将SEQ ID No.1所示的DNA片段经Pme1酶切后插入到pWPI载体 中，形成重组载体pWPI-S-RBD-SD-CP05；

2)将所述重组载体pWPI-S-RBD-SD-CP05和psPAX2、pMD2.G共同转 染真核细胞，包装成慢病毒；

3)将所述慢病毒感染真核细胞后，筛选绿色荧光蛋白阳性的细胞继续 培养，建立稳转细胞株；

4)将所述稳转细胞株经培养，裂解细胞，分离含CP05-S蛋白的蛋白裂 解液；

5)将所述含CP05-S蛋白的蛋白裂解液和人血浆混合孵育，提取外泌体， 得到表面偶联S蛋白的外泌体。

优选的，步骤1)中DNA片段包含编码CP05-S蛋白的核苷酸序列；所 述编码CP05-S蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

优选的，步骤2)中所述真核细胞包括293细胞。

优选的，步骤5)中所述含CP05-S蛋白的蛋白裂解液和人血浆的体积 比为0.8～1.2:0.8～1.2。

优选的，步骤5)中所述孵育的温度为23～28℃；所述孵育的时间为 50～70min。

优选的，步骤5)中所述提取外泌体的离心力为80000～120000g，所述 提取外泌体的离心时间为4～5h。

本发明提供了所述制备方法制备的偶联S蛋白的外泌体。

本发明提供了所述偶联S蛋白的外泌体在制备抗新型冠状病毒的疫苗 中的应用。

本发明提供了一种新型冠状病毒感染的抑制剂，包括所述偶联S蛋白的 外泌体。