[发明专利]用于深海微生物原位细胞裂解的组合物、试剂、试剂盒及应用有效
| 申请号： | 202010418723.9 | 申请日： | 2020-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN111534509B | 公开（公告）日： | 2022-05-17 |
| 发明（设计）人： | 李文莉;王勇;位站飞;李俊;高兆明;贺丽生 | 申请（专利权）人： | 中国科学院深海科学与工程研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 潘颖 |
| 地址： | 572000 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 深海 微生物 原位 细胞 裂解 组合 试剂 试剂盒 应用 | ||
【权利要求书】：
1.深海微生物原位核酸提取方法，其特征在于，提取过程分为三个步骤：微生物富集、细胞裂解和核酸回收；
(1)微生物富集：使用海水泵将海水注入已经安装有滤膜的滤膜腔，富集微生物于滤膜上；
(2)细胞裂解：针对深海高压低温的条件，采用如下配方的细胞裂解液：
Tris-HCl 50mM、NaCl 150mM、EDTA 1mM、TritonX-100 1％(v/v)、溶菌酶3mg/ml、SDS0.05％、蛋白酶K 20μl/ml；
微生物富集完成后，通过阀门的切换，将海水泵管路切换为裂解液注入蠕动泵；向滤膜腔中注入裂解液置换滤膜腔内海水，并静置裂解细胞；裂解完成后，同时打开裂解液注入蠕动泵和装置后端的乙醇注入蠕动泵，混合后的液体用于后续核酸回收；
(3)核酸回收：核酸回收方式选择使用吸附柱进行回收，将吸附在吸附柱上的核酸保存在裂解液和乙醇的混合液中。
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