[发明专利]用于深海微生物原位细胞裂解的组合物、试剂、试剂盒及应用

说明书

本发明涉及深海微生物领域，特别涉及深海原位细胞裂解组合物、裂解液、试剂盒及其应用。该方法可以在深海低温高压条件下直接获取海水中微生物的核酸。首先通过装置的海水泵将大量海水过滤到滤膜腔中，完成海水中微生物的富集；再通过蠕动泵将裂解液注入到滤膜腔，通过化学裂解方式破坏蛋白从而释放核酸；最后使用核酸吸附柱对核酸进行回收和保存；同时依靠深海核酸提取装置，可以一次获得多达9组的深海海水中微生物的核酸样品。本发明的技术方案中使用的裂解液与商业常温裂解液具有等同效用，且可以有效的避免传统采样方式中由于温度、压力等变化对核酸的影响。目前该技术方法已经成功用于全海深微生物核酸原位提取装置，获得微克级的核酸量。

技术领域

本发明涉及深海微生物领域，特别涉及深海原位细胞裂解组合物、裂解液、试剂盒及其应用。

背景技术

深海生物在整个海洋甚至全球的生态系统中扮演着重要角色。采集不同深度海水中的生物样品，是现代海洋学研究的重要内容。随着各种海洋科学研究与海洋资源开发利用的不断深入，如何快速、方便和有效地对海洋生物进行调查采样，以获得第一手的海洋生物科学研究样品，全面了解特定海域的生物资源情况，成为了当务之急。和传统的采样分析相比，近年发展起来的深海原位细胞富集采样是最有效的深海生物核酸获取手段，是对传统海洋生物学研究方法的一次重大突破。

深海高压低温，如何在原位环境中使深海生物细胞裂解并提取核酸是深海微生物研究的难题。尤其是原位获得的高质量RNA是研究深海生物基因功能的前提。深海核酸提取仪采用泵连接过滤腔(内含生物滤膜)的方式对海水大通量过滤。当过滤足量的海水体积后，触发转换阀切换管路，使泵的入口由海水切换为细胞裂解液，通过置换管路内原有的海水实现过滤腔内微生物和幼虫的细胞支撑蛋白裂解。收集的核酸可以用于高通量测序来研究深海生物的宏基因组和转录组。因此，深海原位富集细胞裂解液对于原位获得深海生物核酸具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了用于深海微生物原位细胞裂解的组合物、试剂、试剂盒及应用。该方法可以在深海低温高压条件下直接获取海水中微生物的核酸。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了用于深海微生物原位细胞裂解的组合物，包括：Tris-HCl 25～50mM、NaCl 100～200mM、EDTA 1～10mM、Triton X-100 1～2％(v/v)、溶菌酶3～5mg/ml、SDS0.05～0.1％(v/v)、蛋白酶K10～20μl/ml。

在本发明的一些具体实施方案中，组合物包括：Tris-HCl 50mM、NaCl 150mM、EDTA1mM、Triton X-100 1％(v/v)、溶菌酶3mg/ml、SDS 0.05％、蛋白酶K 20μl/ml。

在上述研究的基础上，本发明还提供了所述的组合物在制备深海微生物原位细胞裂解的试剂和/或试剂盒中的应用。

本发明还提供了所述的组合物在制备深海微生物原位核酸提取的试剂和/或试剂盒中的应用。

本发明还提供了所述的组合物在制备深海微生物核酸检测的试剂和/或试剂盒中的应用。

在上述研究的基础上，本发明还提供了深海微生物原位细胞裂解的试剂或试剂盒，包括所述的组合物以及可接受的助剂。

在上述研究的基础上，本发明还提供了深海微生物原位核酸提取的试剂或试剂盒，包括所述的组合物以及可接受的助剂。

在上述研究的基础上，本发明还提供了深海微生物核酸检测的试剂或试剂盒，包括所述的组合物以及可接受的助剂。

在上述研究的基础上，本发明还提供了深海微生物原位细胞裂解的方法，采用所述的组合物或所述的深海微生物原位细胞裂解的试剂或试剂盒。