[发明专利]一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液相色谱‑串联质谱法测定血浆中替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法，包括如下步骤：（1）对血浆样品进行前处理；（2）采用液相色谱‑串联质谱法测定经前处理后的血浆样品中替诺福韦艾拉酚胺的浓度；所述液相色谱‑串联质谱法包括色谱条件和质谱条件，其中：所述色谱条件包括：以含0.1%甲酸的2mM醋酸铵水溶液为流动相A，以体积比为1:1的乙腈‑甲醇为流动相B；梯度洗脱，洗脱程序为：0‑0.3min，10%B相，0.3‑1.5 min，10%‑95%B相，1.5‑4.0min，95%B相，4.0‑4.6min，95%‑10%B相，4.6‑5.5min，10%B相；洗脱时间为5.5min。采用本发明的方法可以实现对血浆中替诺福韦艾拉酚胺的快速、灵敏检测；而且血浆用量少，样品前处理简单。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法。

背景技术

替诺福韦艾拉酚胺（TAF）是一种新型的核苷酸逆转录酶抑制剂，其结构式如下：

是替诺福韦的前提药物。该药是吉利德公司已上市药物Viread®的改良版，目前已被美国批准用于治疗成人未失代偿期慢性乙肝的治疗。

相对于Viread®而言，替诺福韦艾拉酚胺的优点十分显著，其只对靶细胞中的特异性酶敏感，如外周血单核细胞中的组织蛋白酶A及肝细胞中的羧酯酶1，替诺福韦艾拉酚胺的非靶向稳定性有助于降低全身暴露量并提高靶细胞中的装载量，临床给药剂量更小，从而提高了药物的安全性和有效性，使其快速成为治疗病毒感染的新一代明星药物，但目前有关其血浆检测和药动学的研究报道较少。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法。采用本发明的方法可以实现对血浆中替诺福韦艾拉酚胺的快速、灵敏检测；而且血浆用量少，样品前处理简单。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法，包括如下步骤：

（1）对血浆样品进行前处理；

（2）采用液相色谱-串联质谱法测定步骤（1）中经前处理后的血浆样品中替诺福韦艾拉酚胺的浓度；

所述液相色谱-串联质谱法包括色谱条件和质谱条件，其中：

所述色谱条件包括：以含0.1%（体积百分比）甲酸的2mM醋酸铵水溶液为流动相A，以体积比为1:1的乙腈-甲醇为流动相B；梯度洗脱，洗脱程序为：0-0.3min，10%B相，0.3-1.5min，10%-95%B相，1.5-4.0min，95% B相，4.0-4.6min，95%-10%B相，4.6-5.5min，10% B相；洗脱时间为5.5min；

所述质谱条件包括：离子源：电喷雾电离正离子检测；喷雾气温度：550℃；雾化气：60psi；加热辅助气：60 psi；气帘气：30 psi；碰撞气：8 psi；喷雾电压（IS）：5500 V；扫描时间：100 ms；扫描方式：多反应监测（MRM）。用于定量的离子反应分别为：m/z 477.2 ®346.1（替诺福韦艾拉酚胺）和m/z 482.3®351.2（替诺福韦艾拉酚胺-d5）；碰撞能量60 eV。

优选的，步骤（1）中，对血浆样品进行前处理的方法为：向100 µL血浆样品中加入50 µL内标溶液，再加入300 µL乙腈，涡流振荡5min，4℃条件下以3900 rpm速度离心10min，取上清液100 µL加入300 µL去离子水，混匀后，取20.0 µL进行LC-MS/MS分析。

更优选的，所述内标溶液为50 ng/mL的替诺福韦艾拉酚胺-d5溶液。