[发明专利]一种川贝母类圆球茎的诱导培养方法

说明书

本发明公开了一种川贝母类圆球茎的诱导培养方法，该方法选取川贝母组培苗上生长的地上茎为外植体，先诱导培养出质地较疏松、颜色为黄白色的愈伤组织，再进一步诱导愈伤组织产生颜色为白色、形状为圆形和直径为0.2～0.4cm的类圆球茎。川贝母类圆球茎的诱导培养，可为川贝母植物的器官形态建成、植株高效再生、遗传转化和其次生代谢物质的生产研究提供大量的实验材料和理论基础，从而能为当前存在的川贝母资源短缺问题提供一条新的解决途径。

技术领域

本发明涉及一种川贝母的组织培养方法，具体是涉及一种川贝母类圆球茎的诱导培养方法。

背景技术

川贝母(Fritillaria cirrhosa D.Don)属百合科植物，生长在海拔3500m～4500m的高度，主产于四川、西藏、云南等省区。川贝母喜冷凉气候条件，具有耐寒、喜湿、怕高温、喜荫蔽的特性。气温达到30℃或地温超过25℃，植株就会枯萎，在海拔低和气温高的地区不能生存。川贝母药材具有清热润肺，化痰止咳之功效，用于肺热燥咳，干咳少痰，阴虚劳嗽，咯痰带血等症状；由于川贝母药材价格昂贵，加之近年来无计划盲目的采挖，自然资源日趋枯竭，预计在近几十年内也难以缓解。组织培养技术具有生长周期短，繁殖率高，不受季节、气候的影响，条件均一等优点，因此应用组织培养方法进行川贝母快速繁殖是解决川贝母药材资源短缺问题的有效方法之一。

类圆球茎细胞具有潜在的分裂能力，可进一步形成植物鳞茎、胚状体和愈伤组织等多种器官结构，具有增殖效率高、生长周期短和可实现大规模化生产的特点，并具备与原植物同样的物质代谢潜能。利用组培技术诱导培养类圆球茎对川贝母植物的保护、再生和合理利用具有重要意义。目前还未见有利用组培技术诱导培养川贝母类圆球茎的报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供一种川贝母类圆球茎的的培养方法。

为达到上述目的，本发明采用的解决方案是：

一种川贝母类圆球茎的诱导培养方法，包括如下步骤：

(1)愈伤组织的诱导培养：选取川贝母组培苗上生长的地上茎作为外植体，切取后将其正接于愈伤组织诱导培养基MS+KT0.5～1.0mg·L^-1+2,4-D0.5～1.5mg·L^-1+NAA0.5～1.0mg·L^-1+琼脂6.5～7.0g·L^-1中，先在温度为5～8℃、无光照的条件下培养7天，再转放在温度为18～22℃、无光照的条件下进行愈伤组织的诱导培养；

(2)类圆球茎的诱导培养：选取步骤(1)中游离在培养基表面的地上茎上端产生的质地疏松、颜色为黄白色的愈伤组织，按0.4～0.8g的质量大小接入改良B5+6-BA1.0～3.0mg·L^-1+NAA0.1～0.5mg·L^-1+尿素1.0～3.0g·L^-1+琼脂3.0～5.0g·L^-1的类圆球茎诱导培养基中，在培养温度为16～20℃、每天光照3～6小时、光照强度为400～800lx的条件下进行类圆球茎的诱导培养；所述改良B5的肌醇改为50mg·L^-1；

(3)类圆球茎的增殖培养：选取步骤(2)中诱导出的直径为0.2～0.4cm的白色、圆形类圆球茎，以1.0～2.0g/100mL的接种量接入类圆球茎增殖培养基MS+6-BA1.0～3.0mg·L^-1+NAA0.1～0.5mg·L^-1+腺嘌呤10～30mg·L^-1+活性炭1.0～3.0g·L^-1中，在培养温度为20～25℃、每天光照6～10小时、光照强度1000～1500lx、每分钟振荡8～12次的条件下进行振荡培养；

上述所有培养基的pH值为5.8～6.2，蔗糖10～20g·L^-1。

进一步地，步骤(1)中地上茎的切取长度为1.0～2.0cm。