[发明专利]一种表达细胞免疫疫苗mRNA的质粒载体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种表达细胞免疫疫苗mRNA的质粒载体，包括T抗原表位表达、定位所需元件的区段和长度大于30的多聚腺苷脱氧核酸poly A片段。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述T抗原表位表达、定位所需元件的区段包括XbaI位点粘性末端、T7 RNA聚合酶识别片段、来自HBB基因的5’-UTR、HLAB蛋白的信号肽序列、编码接头肽段并包括一个BamHI位点的序列、编码3xFLAG-HA标记的可移除序列、编码接头肽段并包括一个BspEI位点的序列、HLAB蛋白的MITD结构域编码序列、来自HBB的3’-UTR序列、XhoI位点粘性末端。

3.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于，所述多聚腺苷脱氧核酸poly A片段的长度为60。

4.根据权利要求1-3任一所述的载体，其特征在于，还包括pNeoCura-Exp060载体中除了长度为30的可替换区段及Xhol和Xbal之间序列以外的其它序列。

5.根据权利要求1-4任一所述的载体，其特征在于，还包括启动子序列。

6.根据权利要求1-5任一所述的载体，其特征在于，所述启动子序列为T7。

7.一种根据权利要求1-6任一所述的表达细胞免疫疫苗mRNA的质粒载体的构建方法，包括以下步骤：

S01，使用限制性内切酶XbaI和XhoI将pNeoCura-Exp060载体中长度为30的区段移除；

S02，并连接插入一段XbaI位点粘性末端、T7 RNA聚合酶识别片段、来自HBB基因的5’-UTR、HLAB蛋白的信号肽序列、编码接头肽段(GGSGG)并包括一个BamHI位点的序列、编码3xFLAG-HA标记的可移除序列、编码接头肽段(GGSGG)并包括一个BspEI位点的序列、HLAB蛋白的MITD结构域编码序列、来自HBB的3’-UTR序列、XhoI位点粘性末端的人工合成序列，构建为pNeoCura-TVac质粒载体。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S11，酶切pNeoCura-Exp060质粒并回收长片段；

S12，合成携带有pNeoCura-TVac载体特定插入片段的序列；

S13，连接为pNeoCura-TVac载体。