[发明专利]一种基于pH/MMP响应的“可解离”纳米胶束的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于pH/MMP响应的“可解离”纳米胶束的制备方法，其特征在于，首先，合成靶向性前药的透明质酸@R，再将其马来酰亚胺化；其次，将马来酰亚胺化后的前药通过基质金属蛋白酶敏感肽与pH敏感嵌段聚（β-氨基酯）连接，形成具有pH/MMP双敏感的嵌段，通过自组装包裹免疫调节剂，得基于pH/MMP响应的“可解离”纳米胶束，具体步骤如下：

（1）透明质酸前药的合成：取480-500mg的透明质酸溶解于15-25mL的甲酰胺溶液中，加入70-80mg 4-二甲氨基吡啶和115-125mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，40℃搅拌1h，对透明质酸的羧基进行活化；随后，将50mg抗肿瘤药物R溶于1mL的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，继续搅拌24h，反应完成后，将反应液置于MWCO:5000Da的透析袋中，在体积浓度75%乙醇溶液中透析12h，再置于体积浓度50%乙醇溶液中透析12h，然后置于去离子水中透析48h，除去未反应的物质，将所得溶液冻干，即得透明质酸前药，4℃下保存备用；

所述抗肿瘤药物R为蒽环类药物的紫杉醇或阿霉素；

（2）透明质酸前药的马来酰亚胺化：取630-650mg的6-马来酰氨基甲酸、680-700mg N-羟基丁二酰亚胺和1.18-1.2g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶解于20-25mL N,N-二甲基甲酰胺溶液中，室温搅拌1h，随后加入480-500mg透明质酸前药，室温反应24h，再将反应溶液置于MWCO:5000Da的透析袋中，在去离子水中透析3天，冻干得到马来酰亚胺化的透明质酸前药；

（3）R@HA-多肽（R@HA-peptide）的合成：取80-100mg多肽（SH-peptide-COOH）、480-500mg马来酰亚胺化的透明质酸前药，在室温下搅拌24h，将反应液置于MWCO:5000Da透析袋中，在去离子水中透析2天，冻干，备用；

所述多肽为MMP-2敏感肽（SH-CPLGLAGG-COOH，SH-GPLGVRGG-COOH）或MMP-9敏感肽（SH-CGPLGLPGKGG-COOH）；

（4）pH/MMP敏感嵌段的合成：取480-500mg R@HA-peptide、70-80mg N-羟基丁二酰亚胺，115-125mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应1h，加入580-600mg PAE-NH₂，反应24h，将反应液置于MWCO:5000Da透析袋中在去离子水中透析3天，冻干得R@HA-peptide-PAE，即pH/MMP敏感嵌段；

（5）制备pH/MMP响应的“可解离”纳米胶束：称取20mg R@HA-peptide-PAE、免疫调节剂4mg，溶于1ml的二甲基亚砜中，逐滴加入去离子水直至浑浊出现，室温搅拌6h，将反应液置于MWCO:5000Da透析袋中，在去离子水中透析12h，然后将所得溶液用0.45μm的滤膜过滤，获得pH/MMP响应的“可解离”纳米胶束；

所述免疫调节剂为对肿瘤微环境调节的药物塞来昔布、NLG919或GW3965。