[发明专利]检测大环内酯类化合物的代谢物的方法和试剂盒有效
申请号: | 202010433868.6 | 申请日: | 2020-05-20 |
公开(公告)号: | CN111474278B | 公开(公告)日: | 2022-11-01 |
发明(设计)人: | 张峰;凌云;王佳;姚美伊 | 申请(专利权)人: | 中国检验检疫科学研究院 |
主分类号: | G01N30/06 | 分类号: | G01N30/06;G01N30/88 |
代理公司: | 北京鼎真知识产权代理事务所(普通合伙) 11815 | 代理人: | 洪波 |
地址: | 100176 北京市大*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 内酯 化合物 代谢物 方法 试剂盒 | ||
1.一种检测大环内酯类化合物的代谢物的方法,其特征在于,包括:
将待测样品进行提取处理和净化处理,以便得到待测液;
利用超高效液相色谱与四极杆静电场轨道阱傅里叶转换联用质谱联用系统进行检测,以便对所述大环内酯类化合物的 代谢物进行定性分析和/或定量分析,其中,所述超高效液相色谱的色谱柱为C18色谱柱,规格为2.1×100 mm, 3.5 μm,
其中,所述提取处理包括:
将所述待测样品与提取剂混合,以便得到第一混合物,所述提取剂为0.05%-0.1%甲酸-乙腈、无水硫酸镁和氯化钠的混合物;
将所述第一混合物进行超声处理,以便得到第二混合物;
将所述第二混合物进行离心处理,以便得到第一上清液,
其中,所述净化处理是利用净化剂进行的,所述净化剂为乙酸钠、N-丙基乙二胺和C18的混合物,
其中,所述色谱的洗脱剂为A:0.1%甲酸,B:乙腈,
所述色谱的洗脱条件为:10%B,0-1分钟;10%-98%B,1-15分钟;98%B,15-20分钟;98%-10%B,20-21分钟;10%B,21-25分钟,
所述代谢物包括:红霉素A肟、N-去甲基克拉霉素和N-去甲基罗红霉素。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述净化处理包括:
将所述第一上清液与净化剂混合,以便得到第三混合物;
将所述第三混合物进行超声处理,以便得到第四混合物;
将所述第四混合物进行静置分离,以便得到第二上清液;
将所述第二上清液进行干燥过滤,以便得到所述待测液。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,基于10mL 0.05%-0.15% 甲酸-乙腈,含有300-500mg无水硫酸镁和1-3g 氯化钠。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述净化剂中,乙酸钠、N-丙基乙二胺和C18的质量比为(10-20):1:(1-4)。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述超高效液相色谱的色谱条件包括:
进样温度:30℃;
样品温度:10℃;
进样量:5.0 μL;
流量:0.2 mL/min。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述质谱的质谱条件包括:
离子源:HESI源;
毛细管温度:350℃;
喷雾电压:3.6KV;
鞘气:40psi;
辅助气体:10 arb;
加热器温度:350℃;
质谱检测方式:Full-ms和dd-ms2。
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