[发明专利]一种利用发根农杆菌转化获得整株转基因木本植株的方法

权利要求书

1.一种利用发根农杆菌转化获得整株转基因木本植株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）将含有目的基因的表达载体转入发根农杆菌后并活化，得到含有目的基因的活化发根农杆菌菌液；

所述表达载体包括普通表达载体和特定表达载体，所述特定表达载体为地塞米松诱导型启动子载体PTA7002中插入 CamV35S::WUSCHEL1-CamV35S::目的基因序列；

（2）将木本植物组的培苗放入继代培养基中继代培养后，切掉愈伤团，转入生根培养基中预培养，得到预培养组培苗；所述继代培养的时间为28-32天，预培养时间为4-6天；

（3）取出所述预培养组培苗后，切掉愈伤组织，切口处蘸取所述含有目的基因的活化发根农杆菌菌液，然后吸干多余菌液得到侵染组培苗；

（4）将所述侵染组培苗放回生根培养基中共培养，再插到含有抗生素的MS培养基中培养，直到长出转基因毛状根，得到转基因根系；所述共培养时间为1-2天，培养条件为28℃，24h黑暗；

（5）待所述转基因根系的根长到5cm时切下，先后两次转入根芽转化预培养基中培养直至生芽，得到转基因地上部分转基因芽；第二次转入的根芽转化预培养基中添加地塞米松或MdWUSCHEL1蛋白质；

所述地塞米松的添加量为5-10 μm/L；所述MdWUSCHEL1蛋白质的浓度为5μM/L；

（6）将所述转基因芽先转入继代培养基，再转入生根培养基中培养至生根，得到整株转基因木本植株；

所述木本植株包括苹果、猕猴桃、樱桃、桃、桂花。

2.根据权利要求1所述的利用发根农杆菌转化获得整株转基因木本植株的方法，其特征在于，所述步骤（2）中生根培养基为每升MS液体培养基中含0-0.7mg/L IBA、0-0.1mg/LIAA、200mM/L cPTIO、20-25g/L蔗糖和8.5g/L琼脂，pH为5.80-5.85。

3.根据权利要求1所述的利用发根农杆菌转化获得整株转基因木本植株的方法，其特征在于，所述根芽转化预培养基为MS液体培养基中含0-1.0mg/L TDZ、0-1.0mg/L NAA、500mg/L特美汀、30g/L蔗糖和8.5g/L琼脂，pH为5.80-5.85。