[发明专利]一种提高经济作物对黄瓜花叶病毒抗性的方法

说明书

本发明公开了一种提高经济作物对黄瓜花叶病毒抗性的方法。该方法包括以下步骤：(1)于1/2MS平板或土壤中，光照培养作物12～16h后，再暗培养作物8～10h；(2)将构建得到的过表达载体Flag‑HA‑WRKY30OX转入步骤(1)培育得到的植物材料的愈伤组织中；(3)继代2～3次后，提取总RNA，并筛选出成功转入WRKY30OX的植株进行培养即可。本发明通过将WRKY30基因导入作物中，使其在作物中成功表达，能够有效的提升作物对于黄瓜花叶病毒的抗病性，从而能够对作物品种进行定向改良，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种提高经济作物对黄瓜花叶病毒抗性的方法。

背景技术

黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic Virus，CMV)是世界范围内流行的一种植物病毒，植株可在除生长点以外的任何部位发病。现有报道中，CMV可侵染主要经济作物和观赏植物1200多种。其中烟草受其危害最大，油菜和西蓝花等十字花科作物亦受到较大危害。通过现代分子生物学手段，利用转基因技术在经济作物中的应用，培育抗病或耐病新品种是解决CMV危害的主要方式。

为了适应环境，降低细菌、真菌和病毒等各类生物胁迫对植株的损害，植物进化出了复杂的防御机制来应对。在病毒侵染过程中，植物触发一系列细胞事件，通过几个平行的信号转导途径，调节特定转录因子的水平，最终导致编码合成参与病毒抗性的效应蛋白或代谢物的基因的上调或下调，从而增强对病毒的抵抗力和耐受性。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种提高经济作物对黄瓜花叶病毒抗性的方法，可有效的提高作物对于黄瓜花叶病毒的抗性。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种提高经济作物对黄瓜花叶病毒抗性的方法，包括以下步骤：

(1)于1/2MS平板或土壤中，光照培养作物12～16h后，再暗培养作物8～10h；

(2)将构建得到的过表达载体Flag-HA-WRKY30OX转入步骤(1)培育得到的植物材料的愈伤组织中；

(3)继代2～3次后，提取总RNA，并筛选出成功转入WRKY30OX的植株进行培养即可。

进一步地，作物为烟草、油菜或西蓝花。

进一步地，光照培养时间为16h，暗培养时间为8h。

进一步地，WRKY30基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，步骤(3)通过RT-PCR鉴定作物中WRKY30基因的表达情况，并筛选出成功转入WRKY30OX的植株。

进一步地，RT-PCR的反应体系包括：2μL 10×PCR Buffer、1.6μL DNTPs(2.5mM)、1.2μLL primer(100pmol/μL)、1.2μLR primer(100pmol/μL)、0.2μL TaqDNA Polymerase(3U/μL)、1μL cDNA，最后用ddH₂O补足至20μL。

进一步地，RT-PCR的反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min；51℃退火30s；72℃延伸30s；共30个循环，最后72℃延伸10min。

上述WRKY30基因在分子生物学辅助育种技术中的应用。

上述WRKY30基因编码的蛋白在提高作物对黄瓜花叶病毒抗性中的应用。

本发明的技术原理为：