[发明专利]一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法

权利要求书

1.一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）抽取静脉血置于惰性分离胶促凝真空采血管，加入惰性分离胶和促凝剂，混合后离心得到待测血清；

（2）取类固醇激素的内标液复溶以后加入释放剂A稀释，得到内标工作液, 所述释放剂A包括乙腈、甲醇；

（3）取至少6份已知浓度的类固醇激素的母液加入甲醇进行稀释，得到不同浓度的标准曲线溶液；

（4）试液配置：配置待测样品、标准曲线样、质控样，所述待测样品包括待测血清、内标工作液；所述标准曲线样包括标准曲线溶液、内标工作液；质控样包括质控溶液、内标工作液，所述质控溶液为去激素的人血清中加入已知量的类固醇激素的溶液；

（5）将待测样品、标准曲线样、质控样经混合、离心；

（6）平衡固相萃取板：将释放剂A、蒸馏水依次放到固相萃取板上，调整真空度使释放剂A、蒸馏水通过所述固相萃取板；

（7）取步骤（4）所述的待测样品、标准曲线样、质控样分别放到平衡以后的固相萃取板上，调整真空度使得待测样品、标准曲线样、质控样通过固相萃取板；

（8）淋洗：取甲醇放置于经步骤（7）所述的固相萃取板，调整真空度使甲醇通过固相萃取板；

（9）洗脱：将经过步骤（8）处理的固相萃取板底部的废液接收板换成上样板，将乙腈放到固相萃取板上，收集洗脱液，加入的甲醇，进样分析；

（10）以标准曲线样中类固醇激素的峰面积与内标工作液中的类固醇激素的峰面积的比值为纵坐标，以标准溶液中类固醇激素相应的浓度为横坐标进行线性回归，获得类固醇激素线性回归方程，将待测样品、质控样中类固醇激素的峰面积与内标工作液中的类固醇激素的峰面积的比值带入标准曲线线性方程计算待测样品中类固醇激素的浓度。

2.根据权利1所述的一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法，其特征在于，所述11项类固醇激素包括：皮质素、皮质醇、皮质酮、11-脱氧皮质醇、雄烯二酮、睾酮、脱氢表雄酮、17-羟孕酮、17-羟孕烯醇酮、孕酮、脱氢表雄酮硫酸酯。

3.根据权利要求1所述的一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法，其特征在于，所述质控样有3个，包括类固醇激素高浓度样、类固醇激素中浓度样、类固醇激素低浓度样。

4.根据权利要求1所述的一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法，其特征在于，步骤（2）所述内标液包括皮质素-d7、皮质醇-d4、11-脱氧皮质醇-d5、皮质酮-d4、脱氢表雄酮-d6、雄烯二酮-13C3、睾酮-13C3、17-羟孕烯醇酮-13C22H2、17-羟孕酮-d8、孕酮-d9、脱氢表雄酮硫酸酯-d6。

5.根据权利要求4所述的一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法，其特征在于，所述的内标液中皮质素-d7、皮质醇-d4、11-脱氧皮质醇-d5、皮质酮-d4、脱氢表雄酮-d6、雄烯二酮-13C3、睾酮-13C3、17-羟孕烯醇酮-13C22H2、17-羟孕酮-d8、孕酮-d9、2500 ng/mL脱氢表雄酮硫酸酯-d6质量比为：10：10：5：2.5：50:1：5：5：10：10：250。

6.根据权利要求5所述的一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法，其特征在于，所述母液为6-12份。

7.根据权利要求6所述的一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法，其特征在于，所述母液中皮质素、皮质醇、11-脱氧皮质醇、皮质酮、脱氢表雄酮、雄烯二酮、睾酮、17-羟孕烯醇酮、17-羟孕酮、孕酮、脱氢表雄酮硫酸酯的质量比为50：100:10：5:10:2：5:20：10:5:2000。

8.根据权利要求7所述的一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法，其特征在于，步骤（2）所述内标液、释放剂A的体积比为1:200。

9.根据权利要求8所述的一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法，其特征在于，所述释放剂A的质量浓度为80-85%。

10.根据权利要求9所述的一种同时检测血清中11项类固醇激素的方法，其特征在于，所述进样分析过程中液质流动相包含乙酸铵、甲酸。