[发明专利]一种RT-LAMP法检测口蹄疫病毒的引物组和试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种RT‑LAMP法检测口蹄疫病毒的引物组和试剂盒及其应用。所述引物组的6条引物位于口蹄疫病毒高度保守的3D蛋白基因内，全基因组的7776‑8050 bp处，本发明同时提供一种RT‑LAMP法检测口蹄疫病毒的试剂盒，检测应用时可根据颜色反应读取结果，绿色或黄绿色为口蹄疫病毒核酸阳性，橙黄色或棕红色为阴性；或者通过核酸电泳分析是否出现梯形条带，如果出现梯状条带，说明样品为阳性，否则为阴性。本发明具有高特异性、高敏感性、操作简便、对仪器设备要求低的特点，能够较好满足目前对口蹄疫病毒现场检测的迫切需要，适合基层兽医、进出口检疫部门、养殖场、屠宰场等现场快速可视化检出口蹄疫病毒。

技术领域

本发明涉及生物诊断检测技术领域，具体涉及一种检测口蹄疫病 毒的群特异性RT-LAMP检测引物组、试剂盒和方法。

技术背景

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的重大动物疫病之一，主要感染猪、 牛、羊等偶蹄类动物，感染动物发病率和死亡率均较高，世界动物卫 生组织(OIE)将其归为A类动物疫病之首，我国也将其列为一类动物 疫病。口蹄疫病毒属小RNA病毒科，口蹄疫病毒属，共7个血清型(O、 A、Asia-1、C、SAT1、SAT2、SAT3型)，70多个亚型，血清型间无交 叉保护作用。口蹄疫的预防和控制是世界性难题，全球每年因该病造 成的直接经济损失到数百亿美元。近年来，我国存在的口蹄疫病毒主 要为口蹄疫O型、A型、Asia-1型。

目前口蹄疫病毒诊断技术方面存在的问题主要包括：风险监视手 段单一，综合感知能力不足；一线检测试剂匮乏，早期发现能力不足。 导致口蹄疫疫情往往是大范围流行时才被发现，防控措施的实施严重 滞后，与我国畜牧业大国地位极不相符。早期及时发现动物疫情是动 物疫病防控的关键，目前常用的口蹄疫病毒检测方法为PCR检测法， 这需要一定的技术水平和硬件条件，然而与动物疫病早期接触的往往 是基层兽医和养殖场技术员，他们对动物疫病的确诊技术水平相对较 低，且受到基层地区简陋条件的制约，会造成一些隐性带毒或早期处 于潜伏期的感染动物无法及时甄别、漏检。

2000年日本学者Notomi等发明了一种基因恒温扩增方法，命名为 环介导等温扩增技术(LAMP)。它针对靶基因的6个区域设计4条特异 性引物(FIP、F3、BIP、B3)，在具有链置换活性的Bst DNA聚合酶 作用下，60～65℃等温高效特异性的扩增目的基因。2002年，Nagae 等在此基础上添加了2条环状引物：上游环状引物(LF)和下游环状 引物(LB)，提高了反应速度，进一步缩短了反应时间。LAMP技术具有 操作简便、可视化、高敏感性、高特异性、仪器设备要求低等诸多优 点，该技术自产生之后已经在转基因食品检测、动物疫病诊断及动物 胚胎的性别鉴定等领域得到广泛的推广及应用，因此建立口蹄疫病毒 群特异性RT-LAMP检测方法，实现对口蹄疫病毒的早期现场快速检出， 对于口蹄疫疫情防控和畜牧业健康发展具有重要意义。