[发明专利]对猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒、猪非典型瘟病毒鉴别诊断的基因芯片以及检测方法

说明书

本发明涉及一种探针组合物，其是用于对猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒、猪非典型瘟病毒进行鉴别诊断的探针组合物；本发明还涉及包含该组合物的基因芯片和试剂盒。

技术领域

本发明涉及兽医诊断技术领域，特别涉及一种对猪瘟病毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒、猪非典型瘟病毒进行鉴别诊断的基因芯片以及使用该基因芯片的检测方法。

背景技术

猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine FeverVirus，CSFV)引起的高度接触性、致死性传染病。猪瘟被OIE列为必须报告的动物疫病之一，在中国被列为“一类动物疫病”。非洲猪瘟(African Swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)引起的一种急性，热性，高度接触性传染病，病程短，死亡率高达100％。仔猪先天性震颤，也称“仔猪抖抖病”或“跳跳病”，是一种由猪非典型瘟病毒(Atypical porcine pestivirus，APPV)感染引起仔猪头部、四肢等局部或全身肌肉表现阵发性挛缩的一种疾病，可导致仔猪站立困难、吮乳受阻甚至死亡。该病毒于2015年在美国首次从具有CT症状的猪血清中发现，随后欧洲、中国和加拿大等国家相继报道在有症状的新生仔猪检测出该病毒，这表明其已在世界范围内流行。目前在我国这3种疾病均有流行，所以对其进行流行病学检测及临床的快速诊断具有十分重要的意义。目前对于猪瘟的防控，我国仍是以接种中国兽医药品监察所自主研发的C株疫苗为主，尽管疫苗的接种对于猪瘟的预防取得了很大的成果，世界上很多国家也已经消灭了猪瘟，但目前临床上缺少有效的诊断方法可以对猪瘟疫苗接种与野毒感染予以鉴别区分。而非洲猪瘟在国际上尚无可用的有效疫苗和药物去治疗和预防

目前，对于猪瘟病毒的检测方法例如病毒分离培养、免疫荧光检测和酶联免疫吸附试验等虽然有其成功的应用，但在应对猪瘟病毒的野毒和疫苗的鉴别诊断问题上，往往一筹莫展。分子生物学检测方法虽然能对猪瘟病毒的野毒和疫苗进行区分，但是这些方法比较费时，操作步骤较为复杂，且难以适用于大量的样本检测。而对于非洲猪瘟病毒和猪非典型瘟病毒的诊断，目前还是以病毒分离及核酸检测还有血清学检测为主。因此，建立一种临床上区分猪瘟野毒感染和疫苗免疫同时能鉴别诊断非洲猪瘟和猪非典型瘟病毒的诊断方法十分必要。

发明内容

近年来，基因芯片技术被广泛应用于医学领域，在基因功能表达、致病机理、临床诊断、药物开发、生物学检测等研究方面取得突出成效。本发明立足于基因芯片技术，针对非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒及猪非典型瘟病毒的保守序列选取靶位基因分别设计了三对区分这三种不同病毒的检测引物和另一对鉴别区分猪瘟野毒及其疫苗的引物及相对应的探针，建立了一种可靠、快速的猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒、猪非典型瘟病毒鉴别诊断基因芯片检测方法，并组装猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒、猪非典型瘟病毒鉴别诊断基因芯片检测试剂盒，为猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟、猪非典型性瘟病毒的快速鉴别诊断和规模化猪场的疫病流行病学调查提供技术支撑。

本申请因而提供了：

1.一种探针组合物，其是用于对猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒、猪非典型瘟病毒进行鉴别的探针组合物，其中的靶标探针包括：

针对猪瘟野毒CSFV-W的探针CSFV-W-P，其序列如SEQ.ID.NO.1：CCCTGGGTGGTCTAAGTCCTGAGTACAG所示，

针对猪瘟疫苗CSFV-V的探针CSFV-V-P，其序列如SEQ.ID.NO.2：ATGCAGGAGGAGATAACCTTGCAGCC所示，

针对非洲猪瘟病毒ASFV的探针ASFV-P，其序列如SEQ.ID.NO.3：TCACTACGGCTGATCTTGTGG所示，以及

针对猪非典型瘟病毒APPV的探针APPV-P，其序列如SEQ.ID.NO.4：ATGCCCACGTCCACCCAAGCC所示。