[发明专利]一种咽拭子样本中病原体核酸提取试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种咽拭子样本中病原体核酸提取试剂盒及提取方法，其特征在于：所述试剂盒包括蛋白酶处理液、裂解液、纳米磁珠、洗涤液和洗脱液；利用该试剂盒进行病原体核酸提取的方法如下：

步骤S1：取一新鲜咽拭子样本于1.5ml离心管中，使用无菌移液枪头向该离心管中加入300ul生理盐水和10-40ul蛋白酶处理液，震荡混匀1min，56℃水浴静置10min；

步骤S2：取50-200ul步骤S1中的样本处理液于1.5ml离心管中，使用无菌移液枪头向该离心管中加入75-300ul裂解液、75-300ul异丙醇和纳米磁珠5-20ul，震荡混匀1min，室温静置10min；

步骤S3：将步骤S2中的离心管置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液；

步骤S4：使用无菌移液枪头向步骤S3离心管中加入300-800ul洗涤液，将该离心管震荡混匀1min，置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液；

步骤S5：重复步骤S4一次；

步骤S6：室温开盖干燥5-20min直至管内无液体残留；

步骤S7：使用无菌移液枪头向步骤S6离心管中加入100-200ul洗脱液，56℃水浴5-10min；

步骤S8：将步骤S7离心管震荡混匀1min，置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸取上清至新的离心管，即获得样本中的病原体核酸。

2.根据权利要求1所述的一种咽拭子样本中病原体核酸提取试剂盒及提取方法，其特征在于：步骤S1中所述的蛋白酶处理液浓度为10-200mg/ml。

3.根据权利要求2所述的一种咽拭子样本中病原体核酸提取试剂盒及提取方法，其特征在于：所述蛋白酶处理液包括蛋白酶K，且蛋白酶K浓度为10-50mg/ml。

4.根据权利要求1所述的一种咽拭子样本中病原体核酸提取试剂盒及提取方法，其特征在于：所述裂解液包括异硫氰酸胍、碘化锂、柠檬酸、Tween20，其中异硫氰酸胍浓度为3-5mM，碘化锂浓度为1-5M，柠檬酸三钠浓度为50-200mM，Tween 20浓度为1％-5％，所述裂解液pH值为4.0-7.0。

5.根据权利要求1所述的一种咽拭子样本中病原体核酸提取试剂盒及提取方法，其特征在于：步骤S2中所述的纳米磁珠添加浓度为50-200mg/ml。

6.根据权利要求5所述的一种咽拭子样本中病原体核酸提取试剂盒及提取方法，其特征在于：所述纳米磁珠为包裹有二氧化硅的Fe₃O₄，所述纳米磁珠直径为200-2000nm，浓度为50-200mg/ml。

7.根据权利要求1所述的一种咽拭子样本中病原体核酸提取试剂盒及提取方法，其特征在于：所述洗涤液包括Tris-HCL、NaCL和无水乙醇，所述Tris-HC的pH为6.5-8.5，浓度为1-5mM，所述NaCL浓度为10-50mM，所述无水乙醇浓度为40％-80％。

8.根据权利要求1所述的一种咽拭子样本中病原体核酸提取试剂盒及提取方法，其特征在于：所述洗脱液为无菌DEPC水，pH值为7.0-9.0。