[发明专利]一种箭叶淫羊藿叶柄组培快繁方法

权利要求书

1.一种箭叶淫羊藿叶柄组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)叶柄消毒：叶柄采集健康无病害的箭叶淫羊藿植株，截成2-2.5cm小段，将外植体材料置于1:800的百菌清可湿性粉剂水溶液中浸泡15分钟，然后捞出叶柄移至500ml的大烧杯中盖上纱布放于自来水下冲洗1小时后沥干，最后转入超净工作台中用75％的酒精溶液消毒25-35s，期间不断用灭过菌的镊子轻轻搅拌，取出用无菌水漂洗3-4次除去残留的酒精，接着用0.1％升汞消毒8分钟，无菌水漂洗3-4次，然后置于灭过菌的滤纸上除去残留的水分备用；

(2)诱导外植体生成愈伤组织：在超净台中将消过毒的叶柄用灭过菌的解剖刀切去两端充分消毒创口，切成1.5-2cm茎段，将茎段用解剖刀沿叶柄纵向划伤2-3处创口，然后将创口轻贴于愈伤组织诱导培养基；在光强1000-2000lux，12h/天光照条件下进行培养，培养温度22-26℃；每25天更换一次培养基，所换的继代培养基配方与原培养基一致，进行愈伤组织的增殖；

(3)诱导愈伤组织分化出不定芽或丛生芽：将诱导产生的愈伤组织转接到不定芽诱导培养基上，在光强1500-3000lux，12h/天光照条件下进行培养，培养温度22-26℃，约20天可观察到诱导不定芽的形成；

芽的增殖培养：切取单个不定芽接种到丛生芽增殖培养基中，在光强1500-3000lux，12h/天光照条件下进行培养，培养温度22-26℃，诱导形成丛生芽；

(4)诱导芽体形成须根：无菌条件下切取单个芽体，接种于生根培养基，在光强1500-3000lux，12h/天光照条件下进行培养，培养温度22-26℃，25天之后即可形成白色须根；

(5)炼苗、育苗：挑选长势良好，根系相对发达的组培苗，在炼苗准备室，揭去组培瓶的盖子，在光强1500-3000lux，12h/天光照条件下进行培养，培养温度22-26℃，空气湿度65％-80％条件下，炼苗5-7天；洗净培养基，栽种到田园土：蛭石：泥炭土：腐殖土＝3:1:2:2混合后的基质中，荫棚炼苗30-60天；炼苗结束后移栽至育苗圃，移栽前对苗圃土壤进行消毒，施适量的有机肥后耙平，以每株距18-25cm进行定植，覆土压实后浇足水，与此同时架设遮阳率为60％-70％的遮阳网，并注意防虫、防旱涝；

步骤(2)所述的愈伤组织诱导培养基为：MS 4.74g/L+6-BA 0.5-1.0mg/L+NAA 0.05-0.1mg/L+ZT 0.1-0.2mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；

步骤(3)所述的不定芽诱导培养基为：MS 4.74g/L+6-BA 0.5-1.0mg/L+NAA 0.5-1.0mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；

步骤(3)所述的丛生芽增殖培养基为：MS 4.74g/L+6-BA 0.5-1.0mg/L+IBA 0.5-1.0mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；

步骤(4)所述的生根培养基为：1/2MS 4.74g/L+6-BA 0.5-1.0mg/L+IBA 0.5-1.0mg/L+活性炭0.4-0.6g/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。